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输血科管理制度、程序性文件、SOP_文件

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4.11 应急措施:

①如遇市电停电,立即通知医院电工房发电;

②冰箱如温度不在 2-6℃之间,立即通知输血科主任采取冰箱维修,将库存血液尽快使用在未使用完毕前另存于其它冰箱(做好冰箱的消毒及温度监测)。

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ABO 血型鉴定

1、测定原理

根据红细胞上有或无 A 抗原或/和 B 抗原,将血型分为 A 型、B 型、AB 型及O 型4种。可利用红细胞凝集试验,通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型,是用已知抗—A 和抗—B 分型血清来测定红细胞上有无相应的 A 抗原或/和B抗原;所谓反定型,是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A 或/和抗—B。

2、标本种类及收集要求 2.1 受检者血清;

2.2 枸缘酸钠抗凝血或未稍取血,受检者血液制成5 %红细胞盐水悬液使用,制备方法见本节附注。

2.3 标本出现中度溶血者,为不合格标本,不能用于检测。 3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以及其他所需物品 抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体): 4、操作步骤 4.1、试管法

4.1.1 取洁净小试管(内径10mm×60mm)3支,分别标明抗—A、抗—B和抗—A十 B,用滴管分别加抗—A、抗—B 和抗—A 十 B 分型血清各 l 滴(约 50 ul)于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴,混和。

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4.1.2 另取洁净小试管(内径 10mm×60mm)3 支,分别标明 A、B 和 O 细胞。用滴管分别加入受检者血清 l 滴于试管底部,再分别以滴管加入 A、B和O型33%试剂红细胞悬 液l滴,混和。 4.1.3 立即以1000r/min离心 3 min。

4.1.4 将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。

4.1.5 观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度,此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 4.1.6 凝集强度判断标准

4+ 红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成数小块,血清尚清晰。

2+ 红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。 1+ 肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。 ± 镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。

MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈分散分布。

- 表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。 4.2 玻片法

4.2.1 取清洁玻片 1 张(或白瓷板 1 块),用蜡笔划成方格,标明抗

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-A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内,再各加受检者2%红细胞悬液1滴,混和。

4.2.2 另取洁净玻片一张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明A细胞、B细胞和 O 细胞,用滴管各加受检者血清 1 滴,再分别用滴管滴加 A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

4.2.3 将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动,使血清与细胞充分混匀,连续约 15 min,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应;再在低倍镜下观察结果。

5、结果判定 ABO 血型正反定型结果

分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+试剂红细胞 抗-A 抗-B 抗-A 十 B A 细胞 B 细胞 O 细胞 + - + A - + - - + + B + - - - - - O + + - + + + AB - - -

注:+为凝集;-为不凝集。 6、注意事项:

6.1 分型血清必须为批批检试剂,且在有效期内使用;质量性能符合要求。试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签,用毕后应放置冰箱保存,以免细菌污染。试剂开封后有效期为一周。

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6.2 试剂红细胞以 3 个健康者同型新鲜红细胞混和,用生理盐水洗涤 1 次,以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。或使用合格的商品诊断红细胞。试剂红细胞有效期:自制的为 15 天,商品的为试剂有效期。试剂开封后必须贴上开封日期、开封人标签,用毕后应放置冰箱保存,以免细菌污染。试剂开封后有效期为一周。 6.3 生理盐水启用后,有效期为二周。

6.4 所有试剂在开封或使用时,必须检查是否有变质;凡可疑者,必须更换新的试剂进行检测工作。

6.5 试管、滴管和玻片必须清洁干燥,防止溶血。 6.6 操作方法应按规定,一般应先加血清,然后再加红细胞悬液,以便容易核实是否漏加血清。

6.7 按理 IgM 抗-A 和抗-B 与相应红细胞的反应温度以 4℃为最强,但为了防止冷凝集现象的干扰,一般仍在室温(20—24℃)内进行试验,37℃可使反应减弱。

6.8 离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果。

6.9 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。

6.10 判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误。 6.11 对于可能存在不完全抗原的时候,应在各反应方加入凝聚胺试剂,以检验不完全抗原的存在。

6.12 对于可疑结果,必须更换所用的试剂,重新检测。

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