共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒

共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因

的重组鸡痘病毒

韦栋平;刘玉良;邵卫星;卢建红;刘秀梵

【期刊名称】《微生物学报》 【年(卷),期】2004(044)003

【摘要】应用RT-PCR扩增出新城疫病毒F48E8株融合蛋白(F)基因,将其克隆入pGEM-T easy vector构建重组质粒pGEM-TF并进行测序确证.分别从pGEM-T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株(A/chicken/china/F/1998)血凝素(HA)基因,通过一系列分子生物学操作步骤插入到质粒pFPV7S中的鸡痘病毒基因组复制非必需片段构建重组质粒p7SHF,其中F基因和HA基因分别由鸡痘病毒启动子PE/L和合成启动子PS调控.最后将P11-LacZ报告基因表达盒插入质粒p7SHF获得转移载体pFPVHF,用以转染已预先感染鸡痘病毒282E4疫苗株的鸡胚成纤维细胞(CEF).通过在含有X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化重组病毒.PCR和Southern blot检测证实了F基因和HA基因已插入鸡痘病毒的基因组;间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达HA和F蛋白. 【总页数】5页(286-290)

【关键词】新城疫病毒,H9亚型禽流感病毒,重组鸡痘病毒,融合蛋白,血凝素 【作者】韦栋平;刘玉良;邵卫星;卢建红;刘秀梵

【作者单位】扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,扬州,225009;扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,扬州,225009;扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,扬州,225009;扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实