妊娠期糖尿病胎盘组织11β-HSD1和11β-HSD2表达的
分子机理
马 蓉1 刘 建2* 肖晓秋3
【摘 要】摘 要 目的：探讨妊娠期糖尿病患者胎盘组织11β-HSD1和11β-HSD2表达的分子机理。方法：选择正常胎盘组织体外给予游离脂肪酸(PA)组、地塞米松(DEX)组、胰岛素(INS)组以及3种混合液(MIX)组刺激24h后，检测11β-HSD1和11β-HSD2基因和蛋白水平。结果:与基础状态相比，PA组、DEX组、INS组、MIX组胎盘组织中11β-HSD1mRNA的表达均降低(1.00±0.01、0.54±0.03、0.63±0.10、0.42±0.04、0.61±0.07,P<0.05)，11β-HSD2 mRNA的表达均升高(1.00±0.01、1.46±0.12、1.48±0.13、1.53±0.08、1.93±0.09，P<0.05)；11β-HSD1 蛋白水平表达均降低(0.99±0.01、0.43±0.05、0.18±0.02、0.71±0.09、0.54±0.06，P<0.05)，11β-HSD2蛋白水平表达均提高(1.04±0.04、2.27±0.16、4.10±0.98、3.10±0.39、3.98±0.32,P<0.05)。结论：高脂血症、高皮质醇、高胰岛素可以作为独立因素调节胎盘组织中11β-HSDs 的表达，妊娠期糖尿病患者高脂血症、高皮质醇血症、高胰岛素血症可能是引起 11β-HSDs 调控变化的分子机理。 【期刊名称】中国计划生育学杂志 【年(卷),期】2024(026)007 【总页数】4
【关键词】关键词 妊娠期糖尿病；11β-HSDs；胎盘组织；高脂血症；皮质醇；胰岛素抵抗 ·基础研究·
修回日期：2024-05-07
妊娠期糖尿病(GDM)患者大多存在脂代谢紊乱，高脂血症以及促炎性因子分泌增加等是导致胰岛素敏感性下降的共同机制。糖皮质激素在妊娠后期胎儿成熟、器官发育中起重要调节作用[1]。研究提示：胎盘绒毛组织中存在调节糖皮质激素代谢的屏障分子11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSDs)。有研究发现，GDM患者胎盘11β-HSD1 mRNA 的表达降低，而11β-HSD2 mRNA 提高， 11β-HSD1蛋白表达水平降低，而11β-HSD2蛋白水平未见变化[2]。 GDM患者多伴有高胰岛素、高皮质醇血症[2]，在这些合并症的影响下胎盘组织中11β-HSDs表达出现变化。地塞米松广泛应用在糖尿病治疗中，胎盘组织的体外孵育技术已成熟，可通过地塞米松来检测胎盘组织氧化应激水平[3-4]。本研究参照有关方法，对胎盘组织进行体外超生理浓度孵育，分别利用游离脂肪酸、地塞米松、胰岛素以及三者的混合物进行刺激[5]，在保证胎盘组织活力不受影响下，观察对胎盘组织11β-HSDs表达影响，探讨GDM患者胎盘组织中差异变化的可能原因。
1 材料和方法
1.1 标本收集
收集在本院剖宫产分娩(社会因素剖宫产)的糖代谢正常孕妇胎盘组织(经孕妇同意并签署知情同意书)。剖宫产术后将娩出胎盘消毒处理后，沿脐带根部在胎盘母面中央选取一定尺度的胎盘(避开钙化部位)，磷酸盐缓冲液冲洗3次后分割成相等大小块样本，分别放入基础溶液(BASA组)、0.4mM游离脂肪酸(PA组)、0.3μM地塞米松(DEX组)、0.01μM胰岛素(INS组)、PA+DEX+Insulin混合液(MIX组)等溶液中(各溶液浓度参照预实验及保证胎盘组织活性设定)，置于
37℃恒湿培养箱中孵育24h后取出，提取样本组织总RNA 和总蛋白。本研究通过重庆医科大学生物伦理委员会审批，中国临床实验注册。 1.2 实验方法
1.2.1 引物合成 苏州科德莱生物试剂有限公司合成，引物序列为：11β-HSD1引
物
序
列
(5’-AAGTTGCAGTGAGCCGAGATC-3’5’-
TTCCGAGGCAGAGTCTTGCT-3’,AY044083),11β-HSD2引物序列(5’-GGCCAAGGTTTCCCAGTGA-3’,5’-GAGGGTGTTTGGGCTCATGA-3’,NM000196)
1.2.2 总RNA提取 取胎盘组织100mg加入1ml Trizol后提取胎盘组织总RNA；取2ug RNA进行逆转录反应，反应体系20ul。
1.2.3 基因表达测定 cDNA稀释10倍后，取2ul与SYBR premix Ex Taq Ⅱ 及引物进行实时荧光定量PCR法多聚合酶链反应，扩增体系10μl。扩增条件：95℃ 3min,95℃ 变性10 s,退火60℃ 30s,延伸65℃ 5s,循环 39 次。溶解曲线在 65℃-95℃， β-actin来标准化mRNA的表达，对所得产物通过溶解曲线评价其特异性，实时定量PCR的结果用2-△△Ct计算。
1.2.4 11β-HSD蛋白表达检测 ①各组分别取80mg胎盘组织用裂解液充分匀浆处理后， 4℃下高速离心取上清蛋白。②用BCA蛋白定量试剂盒进行定量，取80μg蛋白加5×上样缓冲液100℃煮沸10min，行SDS-PAGE电泳，结束之后转入到硝酸纤维素膜上， 5%牛奶室温焊接下封闭处理1h，用稀释×1000倍的一抗(两种脱氢酶抗体)室温环境下孵育1h后在4℃放置12h；TBST漂洗；按×3000倍比例稀稀释二抗，进行同样孵育处理。③显影,ECL发光液A和B等体积混匀。④洗膜，显影结束之后，全温摇床50℃洗膜 18min,按照同样的
妊娠期糖尿病胎盘组织11β-HSD1和11β-HSD2表达的分子机理
