大豆异黄酮对心理应激所致小鼠卵巢氧化损伤的保护作用
肖卫荣 1，袁照清 2，余玉珍 1，徐良全 3，邹文斌 4
【摘 要】摘要：目的 从抗氧化的角度探讨大豆异黄酮（SI）对心理应激导致的小鼠卵巢氧化损伤的保护作用。方法 以束缚法建立动物的心理应激模型。将50只刚刚性成熟的健康雌性昆明小鼠，按随机数字表法分为5组：对照组、应激模型组、SI低剂量组（83 mg·kg－1）、SI中剂量组（167 mg·kg-1）和 SI高剂量组（333 mg·kg-1），每组 10 只小鼠。 SI组应激的同时给与SI处理。SI组和应激模型组束缚持续30 d，束缚结束后，检测各组小鼠血清皮质醇含量，卵巢组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力及丙二醛（MDA）含量的变化。结果 皮质醇水平：应激模型组及SI低剂量组明显高于对照组（均P＜0.05）；SI各剂量组明显低于应激模型组（P＜0.05），其中SI中剂量组皮质醇水平降低最明显；与对照组相比，SI中、高剂量组皮质醇虽然有升高，但差异无统计学意义（P＞0.05）。卵巢组织中SOD、GSH-Px活力及MDA含量：应激模型组及SI低剂量组卵巢组织中SOD、GSH-Px活力均低于对照组，MDA含量均高于对照组（均P＜0.05）；与应激模型组比较，SI各剂量组小鼠卵巢组织中SOD、GSH-Px活力均明显升高，MDA含量均明显降低（均P＜0.05），其中以SI中剂量组效果最为明显。结论 SI可以对抗或降低应激所致的小鼠卵巢组织的氧化损伤。 【期刊名称】实用临床医学 【年(卷),期】2012(013)012 【总页数】4
【关键词】心理应激；大豆异黄酮；卵巢；SOD；MDA；GSH-Px；动物，实
验；小鼠
卵巢储备功能是指卵巢内存留卵泡的数量和质量，能反映女性的生育潜能和生殖内分泌功能。卵巢储备功能下降（decreasing ovarian store，DOS），可导致女性生育能力减弱及性激素缺乏，进一步发展为卵巢早衰（premature ovarian failure，POF）。近年来，随着社会经济、文化、生活环境、工作节奏等的改变，DOS发病率有逐年上升趋势，严重影响着女性的生殖健康和生活质量。以往研究[1-2]表明，应激可以通过影响内分泌从而影响生殖功能。至于长期心理应激条件下，是否会导致卵泡细胞的氧化损伤，国内外均未见报道。本研究通过建立动物的应激模型，并进行大豆异黄酮（soy isoflavones，SI）干预处理。同时，通过测定小鼠卵巢中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物（glutathione peroxi-dase，GSH-Px）及丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量的变化，探究心理应激对卵巢氧化损伤作用及其损伤机制，明确心理问题对女性生殖健康的影响，为妇女更年期的推迟及卵巢早衰的治疗提供新的思路。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组
选取刚刚性成熟的健康雌性昆明小鼠50只，体质量18～22 g，由南昌大学实验动物中心提供。喂养普通饲料，自由饮水。动物房温度控制在（24±1）℃，湿度为 40%～70%，光∶暗周期为 12 h∶12 h。适应喂养3 d后，按随机数字表法分为5组：对照组、应激模型组、SI低剂量组 （83 mg·kg-1）、SI中剂量组（167 mg·kg-1）和 SI高剂量组（333 mg·kg-1），每组 10 只小鼠。SI组应激的同时给与SI处理。SI各组每日按2%（即 2 mL·100 g-1）给予相应
剂量的 SI，用 0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）配制成混悬液灌胃；应激模型组和对照组每日给予等体积0.5%CMC-Na溶液灌胃。连续30 d。 1.2 心理应激动物模型的建立
参照文献[3]的方法，SI组及应激模型组小鼠以束缚为应激原建立心理应激动物模型。使用50 mL离心管（图1），在离心管管壁前端扎数个孔，保证空气通畅。在离心管盖子上钻孔，待小鼠钻入离心管后，盖上离心管盖子，将小鼠尾部暴露在外面，封闭后的离心管固定于水平桌面上。每天09:00开始，15:00解除，束缚持续30 d。 1.3 检测指标及方法 1.3.1 血清皮质醇测定
在末次束缚应激24 h后，取小鼠眼眶血分离血清，采用皮质醇放射免疫分析测定盒（北京四环生物技术有限公司）检测血清中的皮质醇含量。 1.3.2 SOD、GSH-Px活性和 MDA含量测定
分别摘取各组小鼠卵巢。称重后，按1∶9的比例与冷生理盐水混合，制成10%的匀浆。离心后，取上清液，按试剂盒（南京建成生物工程研究所)要求测定SOD、GSH-Px活性及MDA含量。 1.4 统计学方法
应用SPSS12.0软件进行方差分析，计量资料用±s表示，各时间点组间比较采用成组t检验，各应激组之间两两比较采用SNK-q检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组小鼠血清皮质醇分泌的变化
大豆异黄酮对心理应激所致小鼠卵巢氧化损伤的保护作用
