Q1: 种子带菌、种子健康状况检测
种子外部带菌检测:每个品种选出一百粒种子,放入250ml锥形瓶中,加25ml无菌水后充分震荡,收集悬浮液,以2 000r/min的转速离心10分钟,加少量无菌水悬浮,各吸取1ml加到9cm直径的PDA平板上,涂匀,相同条件下设无菌水空白对照。放入22℃恒温箱中黑暗条件下培养5天后观察。
种子内部带菌检测:将不同品种种子在5%次氯酸溶液中浸泡5分钟,然后用无菌水冲洗三遍,取40粒种子按照不同种子类型结构将其解剖,并将籽粒在5%的次氯酸钠溶液中浸泡5分钟进行表面消毒,分别将同一品种的整粒种子及解剖后不同部分均匀摆放在9cm直径PDA平板上,每皿摆放10粒种子或者10个组织块,每个处理4个重复。在22～28℃温箱中12小时光照/黑暗交替培养5～7d后检查,记录种子带菌情况。并将分离到的各种真菌分别进行纯化,转管保存后,镜检,鉴定到属。
参考文献: 杨峻,刘西莉,王慧敏,李健强,张龙. 五种豆科林草种子带菌检测及药剂消毒处理效果[J].种子,2002,(1):20-21.
Q2: 种子处理方法:
采用NaOH浸泡、H2SO4浸泡、物理摩擦(细砂纸摩擦)、清水浸泡、GA 和CaCl2)方法
Q3:种子生理指标测定:
相对含水量: 采用常压加热干燥法进行测定
过氧化物酶活性测定: 采用愈创木酚法[ 14 ] ,未处理和经30 % NaOH处理过的种子在培养0、3、6、9、12、15、18 d,分别取种子1 g,重复3 次,置于研钵中,加1. 5 ml、20mol/L KH2 PO4 在研钵中研磨成浆,以4 000r /min离心15min,取3ml反应混合液(28μl愈创木酚以50、100 mmol/L pH 0. 6 磷酸溶液, 加19 μl 30%H2O2 混合均匀) ,加0. 2 ml待测样液,用DNA定量光
度计(U2008 OD)在470 nm下测量每分钟吸光度的变化值。 α2淀粉酶活性的测定: 采用3, 52二硝基水杨酸比色法( (DNS法) ,用加热的方法钝化β2淀粉酶粉酶,测出α2淀粉酶的活力。酶活性单位: 麦芽糖mg/[ g(鲜重) ·5min ]。
葡萄糖含量测定: 取种子1 g放入50 ml三角瓶中,加沸水25ml,在水浴中加盖煮沸15 min,冷却后过滤,滤液收集在50 ml容量瓶中,定容。吸取1ml浸出液,加入4 ml蒽酮试剂,于沸水浴中煮沸10 min,冷却后在620 nm处读取吸光度,根据标准曲线查得相应的糖浓度(μg/g) 。各指标采样测定均重复3次.
参考文献: 王微. NaOH处理对结缕草种子萌发及生理特性的影响[J].种子，29，（1）：11-14.
Q4： 种子净度、千粒重、硬实率、种子生活力的测定:
(1) 种子净度测定:随机称取200 g 种子，分出净种子与杂质，
称重后计算种子净度，3次重复。
( 2) 种子千粒重测定。随机取净种子100 粒称重，8次重复，计算
平均值。
( 3) 种子硬实率测定。随机取净种子100粒于45 ℃自来水中浸
种24 h，统计未吸胀种子数，计算种子硬实率，3次重复。 （4） 种子生活力测定：采用氯化三苯基四氮唑（TTC）法， 取吸涨种子100 粒， 用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半， 将其中的一半置于培养皿内， 加入适量2.0 g·kg－1TTC 溶液， 然后置于30 ℃恒温箱中2 h， 将另一半在沸水中煮5 min 杀死胚， 作同样染色处理， 作为对照观测。
参考文献：王聪，蔡惠芬.不同处理对白刺花种子萌发效果的
影响[J]. 贵州畜牧兽医,2011,35,(5):63-66.
刘建强，胡军飞，欧丹燕，胡冬冬，金水虎.厚藤种子萌发特
性[J].浙江农林大学学报，2011， 28（1）：153-157。
Q5：促进萌发和解除种子休眠的方法： 1. 物理方法
1. 1", 温度处理
低温处理: 利用适当的低温冷冻处理能够克服种皮的不透
种子问题的研究
