新 城 疫 冻 干 疫 苗 生 产 工 艺 流 程
1 生产用毒种制备 1.1
毒种繁殖 将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释
( 如 10-4 或 10-5 ), 尿囊腔内接种
10 日龄 SPF鸡胚 , 每胚 0.1ml 。选接种后 72~120 小时死亡、且病痕明显的鸡胚 , 分别收获鸡胚液 ( 尿囊液及羊水 ), 装于灭菌容器内。 将检验无菌、 且对 1%鸡红细胞凝集价≥ 1:640( 微量法 1:512) 的鸡胚液混合 , 定量分装于安瓿中 , 冷冻保存。注明收获日期 , 毒种代数等。
1.2 1.2.1
毒种鉴定 病毒含量
按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为
10 倍系列稀释，取 10-7 、 10-8 、10-9 3 个稀释度各尿囊腔内接种 10 日 SPF鸡胚 5 个，每胚 0.1ml ，置 36~37℃ 继续孵育，48 小时以前死亡的鸡胚弃去不计， 在 48~120 小时死亡的鸡胚随时取出， 收获鸡胚液，同一稀释度
的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至 逐个收获
鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥ 算 EID50，每 0.1ml 病毒含量应≥ 10 8EID50。 1.2.2
纯净 应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按
《无菌检验或纯
120 小时，取出所有活胚 ,
1:160 ( 微量法 1:128) 者判为感染，计
粹检验标准操作规程》 、《支原体检验标准操作规程》 、《外源病毒检验标准操作规 程》进行。 1.3 1.4
毒种保存 毒种继代
在 - 15℃以下保存 , 应不超过 1 年。 应不超过 3 代。
2 制苗材料选择 选择发育良好的 9~11 日龄 SPF鸡胚作为制苗材料。
3 制苗用毒液的制备 3.1 接种
取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释
( 如 10-4 或 10-5 ), 每胚尿囊腔
内接种 0.1ml ，接种后密封针孔，置
36~37℃继续孵育，不必翻蛋。
3.2 孵育和观察 鸡胚接种后 , 每日照蛋一次，将在 60 小时前死亡的鸡胚弃去。 60 小时后 , 每 4~8 小时照蛋一次 , 死亡的鸡胚随时取出 , 直至 96 或 120 小时 , 不论死亡与否 , 全部取出 , 气室向上直立 , 置于 2~8℃冷却。
3.3 收获 将冷却 4~24 小时的鸡胚取出 , 用碘酊消毒气室部位 , 然后以无菌手术
, 每若干个鸡胚的胚液混合为一组。收获
剥除气室部卵壳，剪开尿囊膜，吸鸡胚液
后的胚液置于灭菌瓶中，作好标识，留样后，结冻保存。
在收获胚液的同时 , 应逐个检查鸡胚 , 如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染
可疑者弃去不用。
4 半成品检验 4.1
无菌检验
经处理过的胚液 , 每组分别取样 , 按《无菌检验或纯粹检验标准操
作规程》 进行无菌检验 , 应无细菌生长。
4.2 病毒含量测定
按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为
10 倍系列稀释，取 10-7 、10-8 、10-9 3 个稀释
度各尿囊腔内接种 10 日 SPF鸡胚 5 个，每胚 0.1ml ，置 36~37℃继续孵育， 48 小
时以前死亡的鸡胚弃去不计，在
48~120 小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，
120 小时，取 1:160 ( 微量法
同一稀释度的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至
出所有活胚 , 逐个收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥
1:128) 者判为感染，计算 EID50，每 0.1 ml 病毒含量 >107EID50 者可用于配制疫苗。
5 配苗及分装
将检验合格的若干组鸡胚液滤过
, 混合于同一容器内 , 按规定羽份 , 加一定比例
2.5%，脱脂奶粉含量为
5%，同时
的蔗糖脱脂奶粉作稳定剂 , 使其最终蔗糖含量为
加入适宜的抗生素 , 充分摇匀 , 定量分装 , 每羽份病毒含量应≥ 10 6 EID50。分装后迅速
进行冷冻真空干燥。
6 成品检验 6.1 6.1.1
物理性状
外观检查 疫苗瓶上的标签，打印出的羽份或头份、生产批号、有效日期
清晰可见、位置适当。瓶上的铝盖稳固不松动。
6.1.2 眼观检查 将疫苗拿到与眼平行位置观察呈微黄色，海绵状疏松团块，然
后再轻微振动，疫苗松动并与瓶壁分离，判为合格。 6.1.3
溶解性检查
用稀释液注射到疫苗瓶内，经轻微振动，疫苗应迅速完全溶
解，无粘块或粘团出现，判为溶解性良好。 6.2
无菌检验 按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》
进行，如有菌生长，应
进行）
进行杂菌计数，并作病原性鉴定（按 《杂菌计数和病原性鉴定操作细则》
和禽沙门氏菌检验每羽份非病原菌数应不超过
1 个（按 《禽沙门氏菌检验法》 进
行）。
6.3 6.4 6.4.1 6.4.2
支原体检验 鉴别检验
按《支原体检验法》 进行，应无支原体生长。
选择发育良好的 10 日龄 SPF鸡胚 10 只，划出尿囊腔接种部位。 将疫苗用无菌生理盐水稀释至
105.0 EID50/0.1mL ，与等量抗鸡新城疫病毒特 异性血清混合，室温中和 1 小时后，尿囊腔接种，每胚 0.1mL。
6.4.3 将接种后鸡胚用石蜡封孔后， 置 37℃继续孵育， 观察 120 小时，在 24~120
小时内应不引起特异死亡，且至少存活
8 只，鸡胚液作红细胞凝集试验，应为阴
性。
6.5 6.6 6.6.1
外源病毒检验 安全检验
按《外源病毒检验法》 进行。
下列方法任择其一。
用鸡胚检验 将疫苗用无菌生理盐水稀释，尿囊腔内接种 10 日龄鸡胚 10
只，每胚 0.1ml （含 10 个使用剂量），接种后 24~72 小时，鸡胚死亡率应不超过20%为合格。 如死亡率超过 20%，可用 20 个鸡胚重检 1 次，重检结果死亡率仍超过20%，该批疫苗判为不合格。
6.6.2
用鸡检验
用 2~7 日龄 SPF雏鸡 20 只，合成两组，第 1 组 10 只，每只滴
鼻接种 0.05mL（ 10 个使用剂量）；第 2 组 10 只，不接种作为对照，两组在相同条
件下分别饲养管理，观察 10 日，应无不良反应。如有非特异性死亡，免疫组与对照组均不超过 1 只。
6.7
效力检验 下列方法任择其一。
6.7.1
用鸡胚检验
6.7.1.1 鸡胚选择 选择发育良好的 10 日龄 SPF鸡胚 15 个，划出尿囊腔接种部
5 个。
位，作出批组及滴度标记，每一滴度接种 6.7.1.2
疫苗稀释
将疫苗按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水稀释至
1 羽份
/0.1mL ，再作 10 倍系列稀释至 10-7 。 6.7.1.3
接种 分别取 10-7 、10-6 、 10-5 三个稀释度尿囊腔内接种鸡胚各
5 个，每
胚 0.1mL，用石蜡封孔。 6.7.1.4
孵育 置 37℃继续孵育至 120 小时，每天上、下午各照检 1 次，48 小
时以前死亡的鸡胚弃去不计，在 48~120 小时死亡的鸡胚，随时取出放在 2~8℃冰
箱中，至 120 小时取出全部活胚放在 2~8℃℃冰箱中 24 小时。 6.7.1.5
凝集价（ HA）测定与计算鸡胚半数感染量（ EID50） 将冷却鸡胚取出，
将同一稀释度的死亡鸡胚液等量混合，分别测定红细胞凝集价；将活胚逐个收获鸡胚液，分别测定红
细胞凝集价， HA≥160（微量法
128）者判为感染，计算半数感染量，每羽份
≥106.5 EID50 （国家标准每羽份≥ 10 6.0 EID50），判为合格。 6.7.2
用鸡检验
6.7.2.1鸡的选择 选取 30-60 日龄健康易感鸡（血凝集抑制价应≤ 4） 10 只。
6.7.2.2 疫苗稀释
将疫苗按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水稀释成每
0.05mL
含 1/100 使用剂量。 6.7.2.3 免疫及攻毒
每只鸡滴鼻接种 0.05mL，10~14 日后，连同条件相同的对
104.0 ELD50，观察 10-14 日，对照鸡全
照鸡 3 只，各肌肉注射鸡新城疫北京株强毒
部发病死亡，免疫鸡至少保护
9 只为合格。
进行，应符合规定。
6.8 6.9
剩余水分测定 真空度测定
按《剩余水分测定方法》
按《真空度测定方法》 进行，应符合规定。
鸡新城疫低毒力活疫苗生产工艺流程图、主要过程控制点和控制项目
种蛋选择
* SPF
种蛋消毒
种胚
前孵化
新城疫灭活疫苗生产工艺流程
1 生产用毒种制备
接种途径
1.1
毒种繁殖
* 接 种
将毒种用灭活生理盐水作适当稀释（如
照蛋时间
接种剂量
10
-4 或 10 ），尿囊腔内
无菌检验
-5
接种
培养温湿度
10 日龄 SPF鸡胚，每胚 0.1ml
* 后孵化及照蛋
。选接种后 72～120 小时之间死亡且病痕明显
病毒含量
的鸡胚，分别收获鸡胚液（尿囊液及羊水）
冷蛋时间
，装于灭菌容器内。将检验无菌，且对
* 冷 蛋
收 获 -15 ℃冷冻保存
冷蛋温度
1%鸡红细胞凝集价在 1：640（微量法
铝盖
分装瓶
1： 512）以上的鸡胚液混合，定量分装于安
瓿瓶中，冷冻保存。注明收获日期、毒种代次等。 1.2
清洗
保护剂
无菌检验
胶
粗洗 毒种鉴定
纯化水粗洗
配 苗
1.2.1
* 灭菌
-8
病毒含量
-9
按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为
注射水洗
10 倍系列稀释，取 10-7 、
纯化水洗 分装前、中、后无检
10 、10 3 个稀释度各尿囊腔内接种
10 日 SPF鸡胚 5 个，每胚 0.1ml ，置 36~37℃
分
装
继续孵育，48 小时以前死亡的鸡胚弃去不计， 在 48~120 小时死亡的鸡胚随时取出，
* 脉动蒸汽灭菌 * 隧道烘箱灭
收获鸡胚液，同一稀释度
加 塞 干 燥
的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至 逐个收获
120 小时，取出所有活胚 ,
冻 干
物理性状
鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥ 1:160
( 微量法 1:128) 者判为感染，计
出 箱
安全检验
无菌检验
压 盖
外源病毒检验
新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程.doc
