牛奶中酪蛋白和乳糖的分离
、原理
牛奶是一种乳状液，主要由水、脂肪、蛋白质、乳糖等组成。牛奶蛋白分为四种： B -乳球蛋白、丫 -乳清蛋白、乳清蛋白和酪蛋白。其中酪蛋白对牛奶蛋白的贡献最大， 占了 80%含有10%的磷，对促进大脑发育起至关重要的作用； 乳清蛋白分子比较 小，相对酪蛋白更加易消化；而乳球蛋白多是牛奶中的生物活性物质，如免疫球蛋 白、乳铁蛋白、溶菌酶 等。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白质的复杂混 合物。蛋白质是两性化合物,当调节牛奶的pH达到酪蛋白的等电点(pH = 4. 8)时, 蛋白质所带正、负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出 来,以此分离酪蛋白。因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚 ,可用此两种溶剂除去酪蛋白中的 脂肪。
乳糖是一种二糖,由一分子B -D-半乳糖的半缩醛羟基与另一分子葡萄糖 C4k的 醇性羟基缩去一分子水通过B -1 , 4糖苷键结合而成。乳糖也不溶于乙醇,当乙醇混 入乳糖水溶液中，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。
H 0H
tt-D- ( + )-葡萄糖(占36%)
H H H CHOH
orD-葡萄糖
CH20H
CH20H
HOH
p-D-半乳糖残基
、实验材料和试剂 脱脂乳或脱脂奶粉
D-葡萄糖残基
醋酸-醋酸钠缓冲溶液（PH=4.7）, 95聽醇，乙醚，碳酸钙粉末，苯肼试剂。 三、实验步骤 1.
从牛奶中分离酪蛋白
在烧杯中加入2g脱脂奶粉，再加入40ml40C, PH=4.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液
40ml，用PH精密试纸检验液体的PHfi（使牛奶pH = 4. 8 ），放置冷却、澄清后，用 尼龙布过滤酪蛋白。（在滤液中加入少量粉状碳酸钙，留作乳糖的分离。）依次用乙醇、 乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白，去除脂肪,待酪蛋白充分干燥后称量 其重量,并计算牛奶中酪蛋白的含量。
2. 从牛奶中分离乳糖
在除去酪蛋白的乳清中，加入1.5g CaCO3粉末，搅拌均匀后加热至沸。加
CaCO的目的一方面是中和溶液的酸性，防止加热时乳糖水解，另方面又能使乳白蛋 白沉淀。过滤除去沉淀，在滤液中加入1?2粒沸石，加热浓缩至3?5ml，加入10ml 95% 乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾， 趁热过滤， 滤液必须澄清。加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用
3.
乳糖成脎试验
95%L醇洗涤产品。
取自制乳糖溶于少量水中，浓度约为5%在试管中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼 试剂①，摇匀，试管口用棉花塞住，在沸水浴中加热，并不时振摇，加热 10?15分 钟后，取出放置冷却，乳糖脎成结晶析出。取少量乳糖脎在显微镜下观察其结晶形
态，可证实为乳糖
① 苯阱试剂有毒，小心使用，勿触及皮肤，如触及皮肤先用稀醋酸洗，再用水 洗。
四、实验注意事项
① 酪蛋白等电点随温度不同而变化,等电点pH为4. 6?4. 8。分离酪蛋白时,边 加醋酸，边搅拌，边测pH,同时观察沉淀。开始快搅拌，接近等电点时，应慢搅拌。
② 酪蛋白沉淀用 200目的尼龙布过滤比较好 ,同时进行抽滤。用滤纸很难过滤 ; 而用纱布过滤 , 酪蛋白容易粘在其上。
③ 用乙醇和乙醚清洗酪蛋白沉淀时 ,应将酪蛋白捣碎 ,并在溶剂中搅拌、浸泡 , 充分洗净脂肪。纯净的酪蛋白应为白色 ,若发黄表明脂肪未洗干净。
牛奶中酪蛋白和乳糖的分离
