最好仔细阅读后下载，感谢您的使用！
实验一 还原糖和总糖含量的测定
（3,5-二硝基水杨酸比色法）
一．目的
1.掌握还原糖定量测定的基本原理； 2.学习比色定糖法的基本操作； 3.熟悉分光光度计的使用方法。 二．原理
在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。
三．仪器.试剂和材料 1.仪器：
（1）25ml刻度试管 （2）玻璃漏斗 （3）三角瓶 （4）100ml容量瓶3个 （5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml） （6）恒温水浴 （7）沸水浴 （8）电子天平 （9）分光光度计 2.试剂；
（1）1mg/ml葡萄糖标准液 （2）3,5-二硝基水杨酸试剂 （3）碘碘化钾溶液 （4）酚酞指示剂 （5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH 3.材料：食用面粉 四．操作步骤
1.XXX葡萄糖标准曲线：取7支25ml刻度试管，编号，按如下操作。 操作项目 葡萄糖标准液（ml） 蒸馏水（ml） 管 号 0 1 2 3 4 5 6 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3,5-二硝基水杨酸（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 吸光度（A540） 0.000 0.081 0.217 0.331 0.467 0.575 0.648 将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
1 / 3
最好仔细阅读后下载，感谢您的使用！
葡萄糖标准曲线0.80.70.60.50.40.30.20.100吸光度趋势线y = 0.5571x吸光度（A540）0.6480.5750.4670.3310.2170.08100.511.5
葡萄糖毫克数（mg)2.样品中还原糖和总糖含量的测定
（1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml定容过的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。 （3）显色和比色，取4支25ml刻度试管，编号，按下表的量操作。 操作项目 还原糖测定管号 1 ○1 0 0 1.5 0.303 0.301 2 ○1 0 0 1.5 0.298 总糖测定管号 Ⅰ 0 1 1 1.5 0.410 0.421 Ⅱ 0 1 1 1.5 0.414 还原糖待测液（ml） 总糖待测液（ml） 蒸馏水（ml） 3,5-二硝基水杨酸（ml） 吸光度（A540） 吸光度（A540）平均值 五、注意事项：标准曲线XXX与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。 六、结果处理
1、○2吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg （1）由管○
2 / 3
最好仔细阅读后下载，感谢您的使用！
由管Ⅰ、Ⅱ吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.235mg （2）计算样品中还原糖和总糖的百分含量如下： 还原糖℅=0.557℅ 总糖℅=0.235℅ 七、问题讨论
1.面粉中主要含有何种糖？ 答：淀粉
2.糖含量定量测定的方法还有哪些？
答：①高效液相色谱法（HPLC） ②苯酚-硫酸法 ③蒽酮法 ④双折射现象
葡萄糖标准曲线0.70.6吸光度（A540）吸光度趋势线公式：y = 0.5298x0.6540.50.40.30.20.10000.20.40.60.8葡萄糖毫克数（mg）11.21.40.0740.1770.3130.4290.527幻想 著
3 / 3
实验一 还原糖和总糖含量的测定
