淀粉酶的固定化实验若干问题

α-淀粉酶的固定化实验若干问题

α-淀粉酶的固定化实验若干问题

本实验中为什么选用石英砂来固定化酶？

固定化酶有许多方法，本实验中采用的是吸附法。 吸附法有物理交换法和离子交换法两种。其中本实验采用的又是物理交换法。该方法是将酶蛋白的分子吸附在惰性载体上，但要选择不引起变性且能保持一定酶活力的载体，且对蛋白质要有高度吸附能力。自然界中有机硅胶、活性炭和石英砂等都可以被用于做载体。现已了解其中石英砂对固定化α-淀粉酶、胰蛋白酶作用较好。

为什么要待固定化酶柱中流出5mL液体后再接收流出

液用于鉴定？

因为固定化酶柱中的酶与流经柱子的淀粉反应需要一定的时间，刚开始流出的液体中由于反应时间过短（在反应柱中快速流入），糊精未生成或生成的量太少，所以不利于后面的颜色鉴定。

如何理解α-淀粉酶的固定化亲和层析洗脱液

选修1教材中出现了“亲和层析洗脱液”，通过对照实验来确定糊精的产生，（1）淀粉溶液+指示剂：呈蓝色，（2）亲和层析洗脱液+指示剂：呈红色，贮于冰箱几天后重复实验：呈红色。而我们实验在操作过程中并没有用到“亲和层析洗脱液”，我在想是不是这样

的操作实验更明显？洗脱的作用是洗脱糊精，让实验更明显？

首先要明确石英砂的吸附原理：

石英砂吸附酶的物理吸附也称范德华吸附，它是由吸附质和吸附剂分子间作用力所引起，此力也称作范德华力。由于它是分子间的吸力所引起的吸附，所以结合力较弱，吸附热较小，吸附和解吸速度也都较快。被吸附物质也较容易解吸出来，所以物理吸附在一定程度上

是可逆的。

其次要明确亲和层析法的原理：

生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性，如抗原与抗体，酶与底物或抑制剂，激素与受体等，这种结合往往是专一的而且是可逆的，生物分子间的这种结合力称为亲和力，亲和层析的分离原理简单地说就是通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性的基质（也称载体）上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

被固定在基质上的分子称为配体，配体与基质共价结合，构成亲和层析的固定相，称为亲和吸附剂。

例如，分离蛋白质的过程中，蛋白质的生物特异性可以帮助选择特异性的配体，一般是目的蛋白质与配体结合而不吸附杂质。蛋白质吸附后再利用洗脱液的快速变换和加入竞争剂的方法进行洗脱。

最后明白α-淀粉酶的固定化亲和层析洗脱液的作用：

从以上的原理和方法来看，洗脱液（应该要不同的成分，不同的洗脱物）在固定化酶实验中是不是应该洗脱糊精，因为糊精的分子也足够大，会吸附在石英砂上，这样可以让对照实验更明显。

什么是“淀粉指示剂溶液”？

选修1第38页有个名称叫“淀粉指示剂溶液”，这是什么物质？

查找了一些资料，综合如下：

淀粉指示剂含有淀粉，是一种经过淀粉加热的水悬浊液，主要检测游离的碘，如食盐中的含碘量。

淀粉指示剂配置方法是称取1g淀粉，加5毫升水（去离子水）先调成糊状，然后加到95毫升沸水中（一定别忘记放沸球，防止暴沸），煮沸2分钟，冷却就可以了，使用期限2周。

另外，据资料，淀粉指示剂最好的材料是甘薯和葛粉来制成，比大米效果好，玉米粉不能用，因为这需要分光光度计测定吸光度灵敏情况决定，因为它需要一定含量的直链淀粉含量才行。

所以，“淀粉指示剂”和“淀粉的指示剂碘－碘化钾”是不一样的。