发酵工程与设备实验 附 录
（3）几种接种用具的制作（接种环、涂棒、接种铲、接种针、酒精灯）
③ 试管和三角瓶的包扎 试管管口和三角瓶瓶口塞上棉花或硅胶塞后，在棉花塞与管口和瓶口的外面用二层报纸包扎好（如有牛皮纸只用单层，效果更好），进行干热或湿热灭菌。试管较多时，一般7支一组，再用双层报纸包扎。
2. 培养基的制备与灭菌方法 （1）配制培养基的基本过程：
药品称量→溶解→调节pH→过滤→分装→塞棉塞和包扎→灭菌 ① 先估算实际需要培养基的用量，然后按比例计算各种组份的用量；
② 称量药品、溶解。量微不宜直接称量的药品可以先配制母液，然后取适当体积达到规定比例。
③ 调节pH。一般用精密pH试纸测定培养基的pH。
④ 过滤。趁热（60℃以上）用滤纸或多层纱布在玻璃漏斗中过滤，使培养基清澈透明，以利某些实验结果的观察。一般无特殊要求，此步骤可省略。
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⑤ 分装。试管分装视管大小及需要而定，若所用试管大小为15mm×150mm时，液体培养基可分装至试管高度1/4左右为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全熔化后，应趁热分装于试管中，用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高的1/5，半固体培养基分装量为管高的1/3为宜，见图7。三角瓶的分装若用于振荡培养微生物时，一般装液量为10％～20％，若用于制作平板培养基时，一般以三角瓶容积的1/2～2/3为宜。
⑥ 塞棉塞。在试管口或三角瓶口塞上棉塞或耐高温硅胶塞。
⑦ 包扎。管装培养基可每7支扎成一捆，或排放在铁丝框内。三角瓶加塞后，每只单独用牛皮纸包好，用线绳以活结形式扎紧，使用时容易解开，并用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期等。
（2）培养基的灭菌
培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定要求进行，以保证灭菌效果和不破坏培养基的营养成分。通常对普通营养培养基用0.10MPa（121℃）高压蒸汽灭菌20～30min。牛乳培养基用0.07 MPa（115℃）菌20min。注意培养基中含有糖类、尿素、氨基酸、酶、维生素、抗生素、血清等成分时，因之在高温下易分解、变性，故应单独使用滤菌器过滤除菌，再按规定的温度和用量加入已灭菌的培养基中。
3. 平板操作 （1）倒平板
倒平板分为持皿法和叠皿法。持皿法是先左手持三角瓶，右手反转手掌用中指和无名指拔出棉塞（或不翻转手掌用小指和手掌拔出棉塞），同时将三角瓶转换至右手，而后左手拿平皿，以大拇指和中指将皿盖打开一缝，至瓶口刚好伸入。三角瓶口经火焰灼烧后，倾
入灭菌或熔化、冷却至55～60℃的培养基约15mL（勿使瓶口靠在平皿壁上，以免沾染皿壁），迅速盖好皿盖，置于桌上轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿底部，冷凝后即为平板培养基。有时冷凝后的培养基表面有冷凝水，为防止冷凝水过多，亦可将培养基冷却至
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45～50℃再倒平板。
（2）平板划线
（3）平板涂布
4. 斜面操作 （1）摆斜面
斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜，如制作半固体或固体高层培养基时，灭菌后则应垂直放置至冷凝，见图11。
（2）斜面接种
① 斜面活化。从生长良好的微生物斜面试管中挑取少量菌苔接种至空白斜面培养基上。操作过程演示见图12-1，12-2。
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② 斜面接种至摇瓶。将10mL左右的无菌水洗斜面，制作菌悬液，从斜面菌液吸取一定量的菌液接种到摇瓶（液体）培养基中。操作过程演示见图14。
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③ 穿刺接种。用来接种厌氧菌，检查细菌的运动能力或用于保藏菌种。
五、思考题
1. 请将每项操作中应注意的细节列出。 2. 谈谈本次实验的体会。
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(涂绍勇3、4.5周)发酵工程与设备实验讲义
