CD55/CD59测定
方法 流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特) 原理： 双色直接免疫荧光法。近年的研究表明，红细胞和白细胞膜上CD55和CD59分子的表达量和缺乏表达细胞的数量对PNH诊断和鉴别有重要意义。血细胞(红细胞和白细胞)通过膜上的抗原分子与荧光素标记的CD55或CD59的多克隆抗体结合。用流式细胞仪检测CD55或CD59表达阳性细胞百分数。 标本采集与处理 受检者的准备 检查对象生活饮食处于日常状态。 采集部位 静脉采血 抗凝剂 EDTA或肝素抗凝血 要求 1．样本量1ml。 2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本不能用。 3．溶血样本不能用。 试剂 品牌 剂型 规格 贮存 贝克曼库尔特 成分 1：单克隆抗体 液体 1ML 2—8℃ (CD59-FITC No.IM3457 CD55-PE No.IM2726) 2：全血溶血试剂 液体 A：甲酸 液体 70ML 室温 B：碳酸钠等 液体 32ML 室温 C：多聚甲醛 液体 14ML 室温 3：鞘液 液体 20L 室温 4：清洗液 液体 5L 室温 5：荧光微球 液体 10ML 2-8℃ 质控品 BEKAMANCOULTER产品，未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于2-8℃可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。
仪器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 样本制备: (一)白细胞CD55／CD59检测 1．准备2支流式细胞仪专用管，分别标记。分别向二管中加入样品100ul。 2．溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血) b. 使用COULTER Q—PREP制备系统 开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。 （*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体） 3．离心后分别加入CD55/CD59 10ul和相应的同型对照10ul。避光20-30分钟。 4．洗涤离心 5．上机测样 (二)红细胞CD55／CD59检测 1．准备2支流式细胞仪专用管，分别标记 2．分别加入CD55／CD59 10ul和相应的同型对照10ul。 3．向二管中加入1：200稀释的样品100ul（可根据红细胞的数量调整），避光20-30分钟。 4．洗涤离心。 5．混匀、上机测样。 报告结果 报告百分数 操作性能 精密度 批内五次重复CV<2％ 参考值 CD55>97% CD59>97% PNH的临界值：RBC CD59>95% WBC CD59>90% PNH的诊断值：RBC CD59>91% 大部分>80% 中性粒细胞CD59>84% 临床意义 用于AA和PNH的诊断和分型诊断。PNH时CD55和CD59明显减低和缺如。 方案（Protocol）(同HLA-B27)
结果 1.RBC: normal 2.RBC: abnormal
3.WBC
流式细胞仪操作规程-SOP
