RKIP低表达与食管鳞状细胞癌浸润、转移及预后的相关性
张付美1，李冬霞2，朱芳恒1，叶 历1，秦栓梅1
【摘 要】摘要:目的 探讨RKIP表达与食管鳞状细胞癌浸润、转移及预后的关系。方法 采用免疫组化法检测87例食管鳞状细胞癌及癌旁组织中RKIP的表达;采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR，MSP)技术检测食管鳞状细胞癌及癌旁组织中RKIP的甲基化情况;采用Kaplan-Meier法评估食管鳞状细胞癌患者术后5年生存率;采用Cox比例风险模型分析RKIP对食管鳞状细胞癌患者预后的影响。结果
【期刊名称】临床与实验病理学杂志 【年(卷),期】2015(000)008 【总页数】3
【关键词】关键词:食管肿瘤;鳞状细胞癌; RKIP;预后;浸润;转移
食管鳞状细胞癌中RKIP的阳性率低于癌旁组织(P＜0.05)，RKIP表达与食管鳞状细胞癌的分化程度和淋巴结转移相关(P＜0. 05);食管鳞状细胞癌中RKIP基因启动子甲基化阳性率高于癌旁组织(P＜0. 05); RKIP低表达与RKIP基因启动子甲基化相关(P＜0. 05); RKIP蛋白阳性组患者5年生存率明显高于RKIP蛋白阴性组(P＜0. 01); RKIP表达是食管鳞状细胞癌的独立预后因素。结论 食管鳞状细胞癌RKIP基因启动子甲基化是导致RKIP低表达的原因之一，RKIP低表达与食管鳞状细胞癌的浸润、转移及预后有关，有望成为食管鳞状细胞癌分子治疗的靶点。
作者单位:1河南省新乡市中心医院病理科，新乡 4530032新乡医学院基础医学院，新乡 453003
网络出版时间:2015－8－20 16:47 网
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http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20150820.1647.017.html 近年来有关肿瘤的早期诊断和治疗有了很大提高，但食管鳞状细胞癌患者总体5年生存率仍较低，浸润、转移是影响其临床治疗和复发的主要因素。RAF激酶抑制蛋白(RAF kinase inhibitor protein，RKIP)是PEBP家族的成员之一，参与体内多种细胞信号转导过程。目前已发现其在乳腺癌、胃癌、结肠癌及黑色素瘤等恶性肿瘤中表达降低［1－4］，并与患者预后相关。目前有关RKIP在食管鳞状细胞癌中作用的报道较少。本文旨在探讨食管鳞状细胞癌中RKIP反常表达机制及与食管鳞状细胞癌浸润、转移及预后的关系。
1材料与方法
1.1一般资料 选取新乡市中心医院2006～2009年食管鳞状细胞癌手术切除标本87例。其中男性58例，女性29例，年龄20～81岁，平均(58. 30±7. 04)岁，其中≥60岁者48例，＜60岁者39例。上述所有标本均经高年资病理医师复查验证和归类，所有患者术前均未行放、化疗。
1.2免疫组化 所有标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片。RKIP抗体工作浓度为1∶50。应用免疫组化SP法检测RKIP蛋白的表达。RKIP阳性表达颗粒位于细胞质，根据参考文献［5］来界定蛋白表达情况。
1.3甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR，MSP)提取手术切除的新鲜食管鳞状细胞癌基因组DNA，紫外分光光度计检测其基因组DNA的含量和纯度(A260/A280＞1. 8)。经亚硫酸氢钠修饰，纯化回收后放入－20℃冰箱备
用。RKIP基因启动子区域的引物参考文献［6］设计，由大连宝生物公司合成。甲基化引物:上游为5'-TTTAGCGATATTTTTTGAGATACGA-3'，下游为5'-GCTCCCTAACCTCTAATTAACCG-3'，长度为204 bp;非甲基化引物:上游为5'-TTTAGTGATATTTTTTGAGATATGA-3'
，
下
游
为
5'-
CACTCCCTAACCTCTAATTAACCAA-3'，长度为205 bp。总体系25 μl，反应条件: 95℃预变性10 min，95℃变性1 min，53℃退火45 s，72℃延伸45 s，35个循环，72℃延伸10 min。反应产物经2%琼脂糖凝胶电泳、EB染色，采用凝胶电泳成像分析系统进行图像分析。
1.4随访 通过电话及门诊问询方式进行随访，手术时间为随访起始日期，截止日期为2014年12月。中位随访时间为48个月。
1.5统计学方法 所得数据应用SPSS 17. 0软件进行统计学分析。采用χ2检验、Fisher精确概率法、Kaplan-Meier法(Log-rank检验)及Cox风险比例模型分析数据，P＜0. 05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 RKIP蛋白在食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织中的表达 免疫组化结果显示，RKIP蛋白阳性颗粒定位于细胞质和细胞膜(图1)。食管鳞状细胞癌组织中RKIP蛋白阳性率(42. 5%)低于癌旁组织(86. 8%)(P＜0. 01); RKIP蛋白与食管鳞状细胞癌分化程度、淋巴结转移有关(P＜0. 05)，与患者年龄、性别及TNM分期无关(P＞0. 05，表1)。
2.2食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织中RKIP基因启动子甲基化情况 食管鳞状细胞癌组织中RKIP基因启动子甲基化阳性率(46. 0%)明显高于癌旁组织(7. 9%)(P＜0. 05);食管鳞状细胞癌组织中RKIP基因启动子甲基化与RKIP蛋白表
RKIP低表达与食管鳞状细胞癌浸润、转移及预后的相关性
