庄河大骨鸡生长激素受体基因内含子2多态性的研究

庄河大骨鸡生长激素受体基因内含子2多态性的研究

谢明欣，许 红，毕 雪，朱弘焱，苏玉虹，田玉民?

【摘 要】为研究庄河大骨鸡生长激素受体（GHR）基因内含子2特点，本试验从200只大骨鸡血液中提取DNA，PCR扩增GHR内含子2后进行HindⅢ酶切和琼脂糖凝胶电泳。研究结果表明，所选取的200只庄河大骨鸡GHR基因内含子2片段均能得到PCR扩增，产物大小为914 bp；扩增产物中具有2个HindⅢ酶切位点，均能获得3个酶切片段（529 bp、247 bp和138 bp），因此该酶切位点上无遗传多态性。 【期刊名称】现代畜牧兽医 【年(卷),期】2015(000)005 【总页数】4

【关键词】庄河大骨鸡；GHR基因；内含子2；内切酶H indⅢ

庄河大骨鸡主产于大连庄河市，是在特殊历史时期及特定的地理和气候条件下孕育出的独特地方品种。大骨鸡具有耐粗饲、耐寒及适应力强的特点，以体型大、胸深宽广、背宽而长、腿高粗壮、腹部丰满著称；所产鸡蛋具有蛋大壳红、营养丰富、味道鲜美的特色。随着大骨鸡消费市场的扩大，产业化进程加快，市场需求量日益增加。然而，与引进的专门化品种/品系相比，对其研究甚少，制约了产业化发展。虽然大骨鸡群体的生长速度较慢、饲料转化率较低，兼具产肉和产蛋性能但其中仍有相当的个体具有较高的生产性能。因此，研究大骨鸡遗传特点，对了解和开发大骨鸡具有重要意义。

据文献报道，影响鸡生长性状主要有生长激素及生长激素受体。生长激素（growth hormone,GH是影响动物3大物质代谢和生长发育的重要激素其发

挥作用时必须要与细胞膜表面的受体结合即生长激素受体（growth hormone receptorGHR），然后通过细胞内的信号转导途径引起生理反应。GHR与促乳素受体、促红细胞生成素受体、白细胞介素受体属于同一家族，其结构特点是受体胞外的200多氨基酸具有显著的同源性，信号途径亦相似。鸡GHR基因的cDNA最早是由Burnside等[1]克隆和测序，发现GHR的cDNA全长为13 kb，具有9个外显子（缺少人类的外显子3），以单拷贝形式存在，共编码608个氨基酸（包括16个氨基酸的信号肽），与哺乳动物核苷酸序列同源性较低，为50%～58%。研究表明，GHR翻译的起始点位于内含子2上，内含子2的多态性与生长速度、产蛋量和产双黄蛋量有关。鉴于以往研究发现庄河大骨鸡GHR内含子2存在HindⅢ酶切位点，因此，本研究拟在获得产蛋数据基础上，通过分析庄河大骨鸡GHR基因片段特点，揭示GHR基因多态性与产蛋性能的相关性，为育种和遗传学研究提供参考和借鉴。净工作台、高速冷冻离心机、恒温水浴箱、PCR扩增仪、水平电泳槽、电泳仪、凝胶成像系统、超纯水系统、-70℃超低温冰箱、微波炉等。 1.3 试验方法

1.3.1 大骨鸡血液基因组DNA提取及质量检测 取大骨鸡静脉血1 mL，用裂解液、蛋白酶K和SDS进行细胞裂解，用酚、氯仿和异戊醇提取基因组DNA。将提取的大骨鸡基因组DNA在1%琼脂糖凝胶中进行电泳，检测DNA质量。 1.3.2 GHR PCR扩增的引物设计 根据NCBI鸡GHR基因序列，选择内含子2为扩增靶片段，利用软件PRIMER 5.0设计引物如下：上游引物(F)：5'agt tctatcagtaggcagtaa 3'下游引物(R)：5'at tcaatctatgctcct tcacaaaa 3' 根据GHR基因序列，利用Primer 5.0分析可知上述扩增片段内含有内切酶

HindⅢ酶切位点。

1.3.3 大骨鸡GRH基因片段PCR扩增 PCR扩增的反应体系如表1。PCR反应条件为：94℃预变性5 min；94℃变性45 s，51.8℃退火45 s，72℃延伸45 s；30～35个循环，最后72℃延伸10 min用1%的琼脂糖凝胶进行PCR产物电泳，DNA分子量标准品是Marker 2000，紫外灯下观察并照相。

1.3.4 PCR扩增产物的酶切 限制性内切酶HindⅢ的酶切反应体系如表2。酶切条件为37℃，3～4 h。

1 材料与方法

1.1 试验动物 选用辽宁医学院畜牧兽医学院科研团队养殖的庄河大骨鸡，随机挑选200只健康雌鸡单笼饲养于同一鸡舍，管理条件完全相同，日粮参照美国NRC营养标准。

1.2 试验仪器与试剂 蛋白酶K、琼脂糖、DL2000 Marker限制性内切酶HindⅢ、PCR用Mix、上下游引物等均购自大连宝生物工程有限公司；其他均为分析纯试剂。试验仪器均为国产或进口设备，如超

1.3.5 PCR产物酶切后电泳 用1%的琼脂糖凝胶进行酶切产物的电泳，DNA分子量标准品是Marker 2000，紫外灯下观察并照相。

2 结果与分析

2.1 大骨鸡血液基因组DNA质量检测 大骨鸡血液DNA琼脂糖凝胶电泳结果见图1。

图1可见大分子量的DNA条带，为基因组DNA。

2.2 大骨鸡GHR基因内含子2 PCR扩增结果 采用作者设计的引物，PCR扩增大骨鸡GHR基因内含子2的部分片段，其琼脂糖凝胶电泳结果见图2。