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解淀粉芽孢杆菌高密度发酵条件的优化
作者：王涛 刘健 左建英 张俊 侯永春 龚骁 孙群 来源：《中国测试》2017年第05期
摘 要：该文探讨解淀粉芽孢杆菌（B. amyloliquefaciens）1841的高密度工业发酵工艺优化，为解淀粉芽孢杆菌的工业化生产提供依据。以平板菌落直径、及培养后的活菌浓度为指标，对种子的保存方法、活化方式和培养基、发酵培养基中的酵母粉和大豆蛋白粉用量以及发酵的后期调控进行筛选和优化。筛选出最佳的工业菌种保存条件为30%甘油为保护剂，-64 ℃保存；最佳活化方法为采用PDA培养基活化，并经过一次48 h活化和24 h二次活化；最佳的转菌时间为在种子培养后17～18 h。最佳的酵母粉和大豆蛋白粉浓度分别为20 g/L和40 g/L，发酵的后期调控需要进行补料和流加氨水将pH控制在7.0±0.2，发酵时间延长至72 h。通过对发酵的基本条件进行筛选和优化，得到可在100 L发酵罐上进行高密度发酵的体系，发酵浓度可达常规发酵的100倍（>1×1014 CFU/mL）。
关键词：解淀粉芽孢杆菌；保存；活化；高密度发酵 文献标志码：A 文章编号：1674-5124（2017）05-0049-04
Abstract： This study explored the high-density fermentation conditions of Bacillus
amyloliquefaciens 1841 by using colony diameter and culturing concentration as index. The optimal strain persevation conditions were using 30% glycerol as protective agent stored at -64 ℃. The optimal strain activation was on the PDA medium with the first activation for 48 hours followed by the second for 24 hours. By taking into accounting of fermentation cost and the product
concentration， the culture after 17-18 hours of seed fermentation was transferred to the fermentation tank of the optimal industrial fermentation medium， in which 20 g/L yeast and 40 g/L soy protein powder were added into the basic medium. By feeding ammonia water to maintain pH at 7.0±0.2 in the late fermentation stage and fermentation time extended to 72 hours， high-density fermentation could be achieved in the 100 L fermentation tank with cells >1×1014 CFU/mL， more than 100 times of the conventional fermentation.
Keywords： Bacillus amyloliquefaciens； preservation； activation； high-density fermentation 0 引 言
近年来，由于化学农药的过渡使用导致了严重的食品安全和环境问题，生物农药的使用已成为一种新的趋势。目前产业化应用较多的主要包括地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等[1]。其中解淀粉芽孢杆菌（Bacillus
amyloliquefaciens）是与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的一个近缘种，具有广泛的抑制真菌和细菌活性。目前已开发的解淀粉芽孢杆菌制剂主要为Subtilex，由美国Microbiol Ltd.公司开发，根
解淀粉芽孢杆菌高密度发酵条件的优化
