糖皮质激素促进周围神经再生的免疫学机制
作者单位：457001 河南省濮阳市油田总医院
通讯作者：王庆武
目的 探讨糖皮质激素促进周围神经损伤再生的免疫学机制。方法 71只SD大白鼠随机分为3组：空白组11只；实验组30只；对照组30只。实验组、对照组应用外科手术的方法造成大白鼠坐骨神经挫伤的模型。实验组腹腔注射地塞米松磷酸钠，对照组腹腔注射等量的生理盐水。应用免疫组化，检测损伤局部自身免疫及组织形态学，观察、评价神经再生情况。结果 （1）组织学观察结果：①电镜观察显示，实验组的神经结构及功能的恢复优于对照组。②光镜观察显示，实验组神经纤维数目较同期对照组多，排列整齐，胶原含量少。（2）实验组较同期对照组免疫球蛋白IgG在损伤局部量少；补体C3两组局部沉积量无明显区别。结论 地塞米松抑制了IgG在周围损伤神经的沉积，改善了损伤神经周围的微环境，促进了神经的再生和结构功能的恢复。
标签： 周围神经； 地塞米松； 免疫组化； 免疫荧光
周围神经损伤一直是临床治疗的难题。目前的研究认为,周围神经损伤后将发生一系列自身免疫反应,这种自身免疫反应将影响周围神经的再生［1］。糖皮质激素在临床上治疗周围神经损伤，其机制是减轻水肿。但其免疫学机制研究较少，目前许多研究证明外周神经损伤后，其周围存在自身免疫反应。本实验着重观察损伤周围神经局部的自身免疫反应及糖皮质激素对自身免疫的影响，为临床提供实验性材料。
1 资料与方法
1.1 一般资料 动物分组：1.5 个月龄清洁级SD大鼠71只,均为雄性,体重190～220 g,随机分成3组：实验组30只，对照组30只，空白对照组11只。
1.2 方法 空白组不做任何处理。实验组、对照组应用外科手术的方法造成大白鼠坐骨神经挫伤模型。造模后实验组腹腔注射地塞米松磷酸钠，对照组腹腔注射等量的生理盐水。利用坐骨神经功能指数（sciatic function index，SFI）评价神经功能恢复情况。光镜、电镜下观察损伤神经纤维间的胶原形成量和神经纤维的恢复情况。免疫组化方法及免疫荧光法检测损伤局部免疫球蛋白IgG、补体C3沉积量，反映自身免疫反应的强度。
2 结果
2.1 造模后15 d、30 d、45 d，实验组SFI的平均值与对照组SFI平均值比较,（P＜0.01），实验组神经功能恢复优于对照组，见图1。
2.2 组织学观察结果 电镜观察显示，对照组可见较多的无髓神经纤维及大量的胶原纤维,有髓神经纤维的髓鞘厚薄不均；实验组再生轴突较对照组多，有髓轴突数多于对照组，髓鞘较对照组厚、平滑，神经纤维较对照组排列整齐紧密，胶原成分明显较对照组少。以上结果表明实验组的神经结构及功能的恢复优于对照组。光镜观察显示，实验组神经纤维数目较同期对照组多、排列整齐、胶原含量少。
2.3 免疫球蛋白IgG免疫荧光及免疫组化结果 造模后15 d、30 d、45 d免疫荧光观察损伤神经局部沉积IgG的荧光强度，显示实验组荧光强度要比对照组弱；免疫组化测定免疫球蛋白IgG所占面积平均值，实验组与对照组同期比较，差异有统计学意义（P＜0.01）实验组神经损伤局部的免疫球蛋白IgG沉积的量明显少于对照组。
2.4 免疫荧光检测损伤局部补体C3的结果 实验组和对照组无区别。造模后15天两组免疫荧光纵切片上均为连续的线条形绿色荧光，横切片上为环形荧光，强度相似；造模后30 d、45 d两组免疫荧光纵切片上均为不连续的荧光线段，横切片上均为荧光短弧线，强度相似。
2.5 相关性分析表明 坐骨神经功能指数值（SFI）与免疫球蛋白IgG在损伤局部沉积量呈负相关性，表明免疫球蛋白IgG对损伤神经的结构功能恢复起负面作用。地塞米松可减轻周围神经损伤后自身免疫反应,减少了免疫球蛋白IgG的沉积，改善了周围神经损伤后再生的微环境，但对补体C3无影响，不影响巨噬细胞的聚集，从而促进了神经的再生和结构功能的恢复。
3 讨论
3.1 动物的选取及模型制作 大白鼠属于脊椎类动物，其神经解剖恒定，神经纤维形态与生理功能与人类相似，是研究周围神经损伤常用的实验动物模型。动物模型制作：用外科手术造成大白鼠的坐骨神经损伤是经典的造模方法。首先其成功率高，损伤程度易掌握（挫伤、部分横断、完全横断）；其次对动物的危险性小，在无菌条件下操作，不易感染，掌握麻醉剂的使用量，死亡率近似于零。因此国内外许多学者都采用其做动物模型。
3.2 药物的选取 选药原则：易得、价廉、毒副作用小。糖皮质激素具有上述特点，也是临床上广泛应用的药物，以往认为在其治疗神经损伤中，其稳定膜性结构，减少组织损伤，降低纤维组织增生，延缓肉芽组织的形成，减少神经组织周围及束间的黏连，有利于轴突通过受损处，促进神经功能的恢复［2］。近些年来，随着神经系统免疫反应的发现，学者对糖皮质激素治疗神经系统损伤的机制有了新的认识，成为研究的热点。刘强等［3］应用得宝松（二丙酸倍他松和倍他米松磷酸钠混合而成的注射混悬液），对大白鼠坐骨神经损伤进行治疗研究，发现得宝松对周围神经损伤后的结构功能恢复有一定的治疗作用。王秀丽［4］应用利美达松（结合了棕榈酸的地塞米松，Dexamethasone palmitate）对慢性卡压周围神经损伤进行治疗研究，利美达松又促进损伤神经再生的作用。本实验选用地塞米松作为研究药物，着重利用其抑制免疫反应的作用，减少免疫球蛋白
IgG在神经损伤局部的沉积量，减少自身免疫反应，从而改变神经损伤处的微环境，促进损伤神经的结构功能的恢复，但其抑制免疫球蛋白IgG的机制及抑制免疫球蛋白IgG的亚型尚待进一步研究。
3.3 本实验的创新和意义 免疫球蛋白IgG由浆细胞分泌，是体液免疫中的重要成分，其主要作用是促进淋巴细胞在免疫反应局部的聚集，引起免疫反应。糖皮质激素降低其血清中的含量［5］，机制尚不清楚。在坐骨神经损伤程度相同下，实验组免疫球蛋白IgG沉积的量较对照组少，说明坐骨神经损伤处的免疫反应较对照组轻。并随治疗时间的延长，其沉积量的减少速度较对照组快。同时，实验组和对照组大白鼠的坐骨神经功能指数表明：实验组大白鼠坐骨神经功能恢复较快。光镜和电镜的组织学观察显示，实验组大白鼠损伤坐骨神经的结构恢复较对照组完整。说明了免疫球蛋白IgG沉积量越多，自身免疫反应越重，神经组织结构和功能恢复越差。
实验中采取免疫荧光和免疫组化两种方法分别定性、定量测定免疫球蛋白IgG在损伤神经局部的沉积量，证实了神经损伤后自身免疫反应的存在。免疫球蛋白IgG沉积量化测定，表明了免疫球蛋白IgG对损伤周围神经结构功能恢复的负面影响。通过应用统计学中的相关性分析，IgG与损伤神经的结构功能恢有高度负相关性。
本实验应用免疫荧光方法观测补体C3在损伤坐骨神经局部的沉积情况，发现实验组与对照组无明显区别。在造模后15 d补体C3在损伤神经处的沉积量较多，造模后30 d、45 d，补体C3在损伤神经处的沉积量明显减少，几乎检测不到。补体C3是巨噬细胞的重要的趋化因子之一，造模后15 d在损伤神经处沉积，有利于早期巨噬细胞向损伤神经处的游走聚集，这可能是巨噬细胞在损伤处2～3 d逐渐聚集，7 d达到高峰，18～21 d开始下降的原因之一。近来研究表明，巨噬细胞是导致施万细胞增殖并进行Waller变性的原因［2］。大量实验证明，巨噬细胞在周围神经损伤后不仅活跃地吞噬神经溃变产物，为神经再生扫清道路，而且通过其细胞活动和分泌各种细胞因子直接或间接地参与了周围神经再生过程。在巨噬细胞吞噬神经性抗原后，分泌白细胞介素-1（IL-1），IL-1能刺激使神经的施万细胞合成和分泌神经生长因子促进神经再生［6］。神经损伤后，施万细胞大量分裂增殖并形成引导神经再生的Bungner带，分泌各种神经营养因子诱导神经再生，并引导神经轴突长入远端。由此笔者可以推导出，补体C3两组无明显差别，对施万细胞的分裂增殖影响不大，地塞米松磷酸钠不仅促进神经组织结构还有利于功能恢复。电镜观测显示，实验组神经纤维髓鞘恢复较快，并且轴突中的轴浆成分恢复较完整，笔者认为与地塞米松磷酸钠抑制损伤局部免疫IgG沉积的结果。
综上所述，糖皮质激素治疗神经损伤机制之一，其能减少免疫球蛋白IgG沉积，减轻损伤神经局部免疫反应，为神经再生创造有利环境，但其抑制免疫球蛋白IgG的机制尚待进一步研究。另外在本实验中，实验组和对照组的HE染色显示，实验组的胶原较对照组的胶原少，这从另一方面揭示了激素通过抑制胶原的合成，减少了神经再生时遇到的阻碍因素，从而间接的促进了神经的生长。本实验中显示，神经损伤后应用激素不影响补体C3在损伤神经损伤部位沉积的量，
糖皮质激素促进周围神经再生的免疫学机制
