多参数流式细胞术分选人骨骼肌源性血管内皮细胞和血管
外膜细胞的方法
作者：古晶晶;杨继辉;杨婷婷;杨小萍;郑波
作者机构：宁夏医科大学,宁夏回族自治区银川市 750004;宁夏医科大学,宁夏回族自治区银川市 750004;宁夏医科大学总医院人类干细胞研究所,宁夏回族自治区银川市 750004;宁夏医科大学,宁夏回族自治区银川市 750004;宁夏医科大学总医院血液科,宁夏回族自治区银川市 750004 来源：中国组织工程研究 ISSN：2095-4344 年：2018 卷：022 期：021
页码：3357-3364 页数：8
中图分类：R394.2 正文语种：chi
关键词：人骨骼肌;肌血管内皮细胞;肌血管外膜细胞;多参数流式细胞分选术;干细胞;国家自然科学基金
摘要：背景:目前分离骨骼肌源性干细胞广泛应用的方法是差速贴壁培养法,而运用多参数流式细胞术分选人骨骼肌源性干细胞的研究较为少见.目的:探索利用多参数流式细胞分选术从人体骨骼肌组织中分选高纯度肌源性血管内皮细胞和血管外膜细胞的方法.方法:收集人体骨骼肌组织,用胶原酶(Ⅰ型和Ⅳ型)及分散酶消化、获得单个核细胞,通过多参数流式细胞分选术分选表型为
CD56+CD34+CD144+CD45-的肌血管内皮细胞和表型为CD146+CD45-CD34-CD144-CD56-的肌血管外膜细胞.结果与结论:①利用多参数流式细胞分选术分选肌血管内皮细胞和肌血管外膜细胞各14例,肌血管内皮细胞在人骨骼
肌单个核细胞中占(0.04±0.01)%,肌血管外膜细胞在人骨骼肌单个核细胞中占(0.30±0.07)%;②将新分选的细胞经过流式细胞仪回测后,肌血管内皮细胞纯度达到(96.8±1.16)%,肌血管外膜细胞纯度达到(92.50±0.50)%,锥虫蓝染色检测肌血管内皮细胞存活率达到(95.58±1.10)%,肌血管外膜细胞存活率达到(95.15±0.67)%;③肌血管内皮细胞和肌血管外膜细胞均能在体外诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,表明二者具有良好的多向分化能力;④实验建立了利用多参数流式细胞分选术分选肌血管内皮细胞和肌血管外膜细胞的有效方法,经过分选所得的肌血管内皮细胞和肌血管外膜细胞纯度高、活性良好.
多参数流式细胞术分选人骨骼肌源性血管内皮细胞和血管外膜细胞的方法
