l 另一种方法，用三联溶解液（见上面MTT甲瓒溶解液）
1) MTT加入培养4h后，结晶可充分形成。这种方法细胞上清可以不用去掉，直接在每孔加入100ul溶解液。（该溶解液因含有SDS，在低温保存的时候易产生结晶，因此在用之前必须提前几小时拿至室温，将SDS结晶全部溶解后再使用。）
2) 放入培养箱中继续孵育4—6小时，镜下观察，待结晶全部溶解后570nm测吸光度。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会长一些。
在实际的操作过程中，往往为了等待4—6小时，使得实验者在下班以后或者晚上来测OD值，给实验者带来了很大的不方便。个人曾经摸索，加入溶解液后过夜再测对OD值基本无影响，但要注意的是一定要避光，不过培养箱关闭后本身就是闭光的，所以加入溶解液后放入培养箱中，第二天上班时再测OD值就可以了。
7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。 六、MTT结果分析 关于如何计算IC50
1、改良寇式法:lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4) Xm:lg 最大剂量
I:lg(最大剂量/相临剂量) P:阳性反应率之和 Pm:最大阳性反应率 Pn:最小阳性反应率
举个例子：各药物浓度作用于某肿瘤细胞后所得MTT值如下
药物浓度ug/ml 100 50 25 12.5 6.25 3.125 0 OD均值 0.080 0.093 0.236 0.374 0.441 0.531 0.614 公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率
抑制率=1-加药组OD值/对照组OD值，如对于100ug/ml的药物，其抑制率=1-0.080/0.614=0.869，各组抑制率如下： 药物浓度ug/ml 100 50 25 12.5 6.25 3.125 抑制率 0.869 0.849 0.616 0.391 0.282 0.135 代入计算公式： Pm=0.869 Pn=0.135
P=0.869+0.849+0.616+0.391+0.282+0.135=3.142 Xm=lg100=2 lgI=lg100/50=0.301
lgIC50=2-0.301*(3.142-(3-0.869-0.135)/4)=1.655 IC50=45.186
该药物的IC50值为45.186ug/ml
MTT实验操作步骤
