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d. 用一个1ml不带针头的一次性输液器抽打裂解物2-3次。
e. 加入200μl 结合液CB和100μl 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。 f. 13,000rpm 离心5分钟，将上清加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。 g. 接操作步骤项下4。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。 4. 5.
加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。
加入600μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 6. 7.
加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 8.
取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好）， 室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。 9.
DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。
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问题与解决方法 问题
评论与建议
*组织块太大，蛋白酶K消化不完全-建议：液氮研磨或者尽量将组织切成小块，或者延长蛋白酶K消化时间至过夜或者在原有消化基础上另加20μl蛋白酶K消化1-2小时。
*蛋白酶K失效了-建议：收到蛋白酶K后，按照每次使用量分装冻
DNA产量低
存，避免反复冻融。
*裂解不完全或者和异丙醇没有充分混匀-建议：加入结合液后，和加入蛋白酶K后立即吹打或者涡旋混匀；加入异丙醇后立即吹打或者涡旋混匀才加入吸附柱，如果太粘稠必须涡旋振荡15秒充分混匀。
组织DNA 降解了
*组织中核酸酶活性导致降解-建议：样品处理前妥善保存在－20℃，处理量不要过量。
*漂洗液WB中忘记加无水乙醇-建议：第一次实验时，在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇。
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建议：确保做了步
洗脱下来的 DNA产量低
骤7，否则残留乙醇会影响洗脱效率。
*使用了水或者其它非最佳液体代替洗脱缓冲液-建议：仔细阅读仔细阅读注意事项5和步骤8和只使用洗脱缓冲液EB洗脱。
A260吸光值 异常偏高
*一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了吸光值-建议：将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟，小心取上清使用。 *一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应-建议：将洗脱
DNA下游酶切 不能切开或者 酶切不完全
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应-建议：确保做了步骤7，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。 的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟，小心取上清使用。
未提取到DNA
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组织 细胞基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
