SSR分子标记鉴定青花菜杂交种‘津青一号’的纯度
江汉民，文正华，刘莉莉，单晓政，孙德岭
【摘 要】摘 要：以青花菜新品种‘津青一号’及其亲本为试验材料，用SSR分子标记技术鉴定杂交种种子纯度，从50对SSR引物中，筛选出了1对在杂交种和父、母本之间存在显著差异的引物(L21)，该引物扩增片段电泳条带清晰可辨，且杂交种含有父、母本的特异互补带型。利用该引物对108株‘津青一号’杂交种进行纯度鉴定，结果为96.30%，与大田形态鉴定结果98.15%相比，SSR标记与大田种植鉴定结果基本一致。这表明，引物L21可用于‘津青一号’的纯度鉴定。
【期刊名称】天津农业科学 【年(卷),期】2016(022)012 【总页数】4
【关键词】青花菜；SSR；种子纯度鉴定
青花菜(Brassica oleracea L.var.italica)，又名西兰花、青花椰菜等，属于十字花科芸薹属1、2年生草本植物。青花菜以主茎及侧枝顶端形成的绿色花球为食用部位，营养物质丰富，无论色泽、口感都备受青睐，深受广大群众所喜爱。 在青花菜的种植生产中，青花菜杂交种子的纯度在很大程度上影响了品质和产量。在种子生产中，由于一些不可避免的因素混入自交产生的F1代种子或劣质种子及一些其他品种的杂交后代，从而导致生产出的种子纯度不高。在种子市场上，不法商贩销售的假冒种子在很大程度上也降低了种子的质量。保证杂交种子的纯度及优良品质，成为确保青花菜市场供应优质青花菜的一个重要前提。鉴定种子纯度的传统方法是大田形态学鉴定，该方法在鉴定周期和鉴定费
用上有其局限性，且形态观察的准确度难以保证。分子标记技术的出现使种子在分子水平上的鉴定成为可能。分子标记技术在种子鉴定方面的应用，节省了鉴定的时间和成本。SSR是DNA分子标记中的一种，是以PCR为基础的技术，多态性高，成本较低，标记呈显性和共显性，操作较易实现，重复性较好[1]。有研究报道，利用SSR分子标记技术能准确鉴定青花菜种子的纯合度[2]。此外，SSR分子标记也已经应用到其他经济作物种子纯度的鉴定，包括水稻、油菜、大豆、玉米等[3-10]。
本研究以津青一号及其父、母本为研究材料，利用SSR分子标记进行筛选，以期得到能产生特殊标记的引物，在检验该引物可靠后将其运用到杂交种子的鉴定中，供杂交种子在分子水平鉴定借鉴。
1 材料和方法
1.1 材 料
试验材料为11DR-100（父本）、10FS-2（母本）、津青一号（F1代）。 1.2 SSR鉴定种子纯度的评价
1.2.1 全基因组DNA提取 以改良CTAB法提取全基因组DNA，获得的全基因组DNA用1%琼脂糖凝胶电泳检测纯度并保存备用。 1.2.2
SSR
引
物
根
据
GenBank
（
http://www.
ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez）网站上公布的青花菜EST序列设计合成SSR引物，选取长度大于100 bp的EST序列，共合成SSR引物50对。
1.2.3 标记筛选 以11DR-100、10FS-2及津青一号的全基因组DNA为模板，对50对SSR引物进行筛选，筛选出可在杂交F1代中扩增出与父母本互补带型的引物。扩增程序为:94℃，5 min;94℃，1 min；55℃,1 min；72℃，45 s；
20 cycles；72℃，10 min。扩增产物用3%的琼脂糖凝胶电泳进行筛选。 1.2.4 分子标记筛选的评价 在种有津青一号的试验田内进行随机抽样，随机选取12个区域，每个区域随机选取9株，通过大田形态学方法对抽取的植株进行纯度鉴定，并用已筛选到的SSR分子标记进行检测，检测得到的结果与试验田种植结果进行比较，以评价所筛选出的分子标记的可用性。种子纯度=（1－非杂交F1个体总数/鉴定的个体总数）×100%[11]。 1.3 种子纯度的鉴定
随机选取种子300粒进行鉴定。以种子长出的真叶为材料进行DNA提取，具体方法为：将滤纸浸湿后放入培养皿中，将种子放于滤纸上，于28℃培养箱中培养，培养过程中注意保湿，待长出真叶后用于全基因组DNA提取，方法同1.2.1。
2 结果与分析
2.1 全基因组DNA提取结果
11DR-100、10FS-2、‘津青一号’的全基因组DNA提取结果如图1。结果显示，DNA主条带较单一，没有明显的降解现象，表明本试验用的改良 CTAB提取法能获得高质量的全基因组DNA，获取的DNA可用于后续的SSR分子标记的筛选。 2.2 标记筛选结果
50对SSR引物扩增11DR-100、10FS-2、津青一号，对双亲及F1代进行特异分子标记分析，筛选可用的SSR标记。经PCR扩增后，有43对引物可扩增出有效条带，并从中筛选出1对可用于鉴定 的 引 物 L21 （F:5′-GGATTTTCAAGACTCTTCGGG -3′ ，R:5′-TGCCAAGTTCGTAGTCTTGC-
SSR分子标记鉴定青花菜杂交种‘津青一号’的纯度
