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2. 按1:1比例稀释血清标本，即25μL血清加入25μL PBS2中。质控血清3 4不需要稀释。
3. 用抗人IgG吸附剂7 处理稀释后的血清：将30μL稀释后的血清加入150μL吸附剂中，彻底混匀。质控血清3 和4 不需吸附剂处理。处理后的血清要离心除去沉淀，以防干扰检测。
4. 在载玻片1 的每孔中加15μL吸附剂处理过的血清。在一个载玻片的每孔中加入15μL不稀释的阳性质控3，在另一个载玻片的每孔中加入15μL不稀释的阴性质控4。
5. 将载玻片放入湿盒中，37℃温育90分钟。
6. 用PBS 2 的缓慢水流简单冲洗载玻片1（避免PBS直接冲入孔内）后，浸泡在PBS中并放置在振荡器上轻轻摇动10分钟。将载玻片在蒸馏水中简单蘸洗。 7. 载玻片1 自然风干。
8. 每孔加入15μL抗人IgM FITC结合物溶液5M（不需稀释）。 9. 将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。 10. 重复6和7的洗涤步骤。
11. 每孔加1小滴封闭介质6，小心盖上盖玻片。
12. 尽快用荧光显微镜在400倍放大率下观察结果。如果不能立即观察，可将其避光放置于2-8oC不超过24小时。 【内部质量控制】
每一批产品在放行前都要经过更加严格的内部质量控制（Q.C.）的检验。质控材料可溯源到经过内部确认的参考血清盘。 【有效性判断】
每一次试验都应设立阳性和阴性质控，以确认试验和试剂盒的有效性。 观察到的荧光模式应为：
阳性质控：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核和胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
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阴性质控：军团菌、肺炎衣原体和立克次体没有荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。 【检测结果的解释】
阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核和胞浆出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体没有荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
如果所有细胞或第10孔出现荧光表明存在抗核或抗细胞抗体，不能判为阳性，应用其他方法进行检测。当质控孔中无荧光时一定要查明原因。
由于非军团菌感染的病人中经常出现交叉抗体，阳性结果需结合临床症状综合评价。建议做较高稀释度的检测来提高阳性预测值。
呼吸道感染IgG联检试剂（PNEUMOSLIDE IgG）更适合于筛查试验。对于广泛流行的疾病，可能会在一个标本中出现几个阳性结果。呼吸道感染IgM联检试剂（PNEUMOSLIDE IgM）由于其高度特异性，是一种非常适用的技术，因为IgM阳性不会超过3个月，但对重复感染灵敏度较低。近期感染诊断的理想方法是同时使用呼吸道感染IgG联检试剂和呼吸道感染IgM联检试剂：IgM联检试剂适用于检测成人的第一个标本和儿童的第一、第二个标本，IgG联检试剂适用于检测成人的第二个标本。
与说明书中所列结果不同不能判为阳性。
在初次感染和再次感染的过程中，IgG和IgM抗体有不同的表现方式：初次感染时，几乎在所有的情况下IgM和IgG均出现（IgM早于IgG出现）；而再次感染时，在所有的情况下均不出现IgM，因此IgG的检测是唯一有用的诊断方法。在许多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG，而IgM一般情况下仅在感染后2—3个月存在于血清中，因此是近期感染的一个有效标志物。 【检验方法的局限性】 1. 本试剂盒用于检测人血清。
2. 建议用户仔细阅读和理解说明书，严格按照程序进行操作才能获得可靠的检测结
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果。特别是样本和试剂的正确吸取以及仔细的洗板、温育的时间控制对获得准确结果都是很重要的。
3. 样本的检测结果应与临床评价以及其他诊断方法结合使用。 4. 本检测不能指出感染部位，不能单独使用。 5. 抗体水平无显著上升时不能排除感染的可能性。
6. 在感染早期采集的样本可能是检测不到IgG的，在这种情况下建议采用IgM检测，或者在14-21天后采集第二个血清样本，并与原标本同时检测来确定是否发生血清转换。
7. 婴儿的IgG检测结果要作谨慎解释，因为出生前母体的IgG被动的传递给了胎儿。对6个月以下的婴儿IgM检测是更为有用感染标志物。
8. 单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的诊断。应采集成对样本（急性期和康复期）同时检测来观察血清转化或抗体水平的明显升高。
9. 对患有自身免疫性疾病病人的血清，用IFA检测时，支原体、腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒，会在细胞上发生非特异性反应，这些血清不能用本方法评价。质控孔用于检测这种现象。在嗜肺军团菌和Q热立克次体中，有时血清会含有与卵抗原反应的抗体，所以使用卵黄囊固定抗原会出现非特异性荧光。当出现这种情况时，该血清就不能用IFA进行分析了。 10. 未对本检测在疗效随访方面的性能做过评估。
11. 除了肺炎外，未对本技术在肺炎衣原体引起的其他疾病方面的性能作过评估。 【产品性能指标】 1. 灵敏度和特异性 嗜肺军团菌血清1型
与另一个商品化的IFA试剂盒对照检测82份血清样本，结果如下：
IgM 样本数 灵敏度 82 94.4% 特异性 98.4% 有非特异性反应的的血清从最终计算中删除。 肺炎支原体
与一种ELISA试剂盒对照检测62份血清样本，结果如下：
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IgM 样本数 灵敏度 62 96.8% 特异性 100.0% 有非特异性反应的的血清从最终计算中删除。 Q热立克次体
与另一个商品化的IFA试剂盒对照检测74份血清样本，结果如下：
IgM 样本数 灵敏度 74 100.0% 特异性 97.6% 有非特异性反应的的血清从最终计算中删除。 肺炎衣原体
与另一个商品化的IFA试剂盒对照检测61份血清样本，结果如下：
IgM 样本数 灵敏度 61 100.0% 特异性 98．0% 有非特异性反应的的血清从最终计算中删除。 腺病毒
与一种ELISA试剂盒对照检测74份血清样本，结果如下：
IgM 样本数 灵敏度 74 85.7% 特异性 97.0% 有非特异性反应的的血清从最终计算中删除。 呼吸道合胞病毒
与一种ELISA试剂盒对照检测97份血清样本，结果如下：
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IgM 样本数 灵敏度 97 93.8% 特异性 100.0% 实用标准文案
有非特异性反应的的血清从最终计算中删除。 甲型流感病毒
与一种ELISA试剂盒对照检测46份血清样本，结果如下：
IgM 样本数 灵敏度 46 94.1% 特异性 96.4% 有非特异性反应的的血清从最终计算中删除。 乙型流感病毒
与一种ELISA试剂盒对照检测40份血清样本，结果如下：
IgM 样本数 灵敏度 40 100.0% 特异性 96.4% 有非特异性反应的的血清从最终计算中删除。 副流感病毒1、2和3型
与一种ELISA试剂盒对照检测36份血清样本。结果如下：
IgM 样本数 灵敏度 36 100.0% 特异性 96.3% 有非特异性反应的的血清从最终计算中删除。 2. 精密度 分析内精密度：
在相同实验条件下由同一个操作人员在同一次试验中对3份血清（2份阳性和1份阴性）分别进行5组加样检测。 结果：滴度变化不超过一个稀释度。 分析间精密度：
在5种不同条件下（不同操作人员或不同试验日期）对3份血清（2份阳性和1份阴性）进行检测。
结果：滴度变化不超过一个稀释度。
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呼吸道感染IgM九项联检试剂说明书终稿子
