典型实验教学案例简介
案例x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量
药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。
一、实验目的
1．掌握双波长分光光度法的测定原理。
2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。
二、实验原理
当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。然后根据ΔA值计算b的含量。
SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。
TMP在239nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。
图l SMZ紫外吸收图谱
1. TMP(0.2μg/ml); 2.SMZ(10.0μg/ml);
3. SMZ+TMP; 4. 辅料
图2 TMP紫外吸收图谱
1. TMP(5.0μg/ml); 2.SMZ(25.0μg/ml);
3. SMZ+TMP; 4. 辅料
三、仪器与试剂
1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL容量瓶
2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品；0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L盐酸溶液；氯化钾
四、实验步骤
1．磺胺甲噁唑的含量测定
（1）平均片重测定：10片，精密称定。 （2）供试品溶液配制： 片剂 过滤
溶解、定容
100m
乙醇
研磨
精密称取片粉
(约50mg SMZ, 10mg TMP)
（3）对照品溶液配制
50mg SMZ对照品
100mL
100mL
乙醇
精称 105 ℃干至恒重
10mg TMP对照品
2.00ml
对照液(1) L
定容
0.4%NaOH
乙醇
定容 2.00ml对照液(2) L
0.4%NaOH
（3）取对照品溶液（2）的稀释液，以257nm为测定波长（λ2），在304nm波长附近（每间隔0.5nm）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求ΔA= A λ2
（2）
－Aλ1（2）= 0，再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶
液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA），计算，即得。
2．甲氧苄啶的含量测定
（1）稀释液配制：取上述供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各5.00mL，分别置于100mL容量瓶中，各加HCl-KCl溶液（0.1mol/LHCl 75mL + 6.9gKCl，加水至1000mL），稀释至刻度，摇匀。
（2）参比波长选定：取对照液(1)的稀释液，以239nm为测定波长(λ2)，在295nm附近（每间隔0.2nm）选择等吸收点波长为参比波长(λ1) ，使ΔA=A λ2（1）－Aλ1（1）= 0。
（3）双波长测定：在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（2）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA），计算，即得。
3．结果计算
?Au?Cs?D?平均片重?As被测药物标示量％＝?100
W?标示量式中ΔAu为供试液的ΔA值，ΔAs为对照液的ΔA值，Cs为对照液浓度（mg/mL），D为稀释倍数，W为取样量。
五、注意事项
试验六双波长分光光度法
