免疫分析法在体内药物分析中的应用

免疫分析法在体内药物分析中的应用

免疫分析法是采用荧光素，同位素或酶等示踪物质标记抗体（或抗原）进行抗原抗体反应，通过对免疫复合物中的标记物的测定，达到对免疫反应进行监测的目的。

1. 免疫分析法的基本原理

免疫分析法的原理是被分析药物(Ag)和标记后的该药物(Ag3)与该药物的特异性抗体(Ab)竞争有限的结合部位,未标记药物(Ag)的浓度决定于标记药物(Ag3)与特异性抗体(Ab)结合的量〔1〕。标记物可能是放射性同位素、酶、荧光物质或化学发光物质,依据标记物的属性,测定其放射性、酶反应后的UV吸收和荧光强度。

2. 免疫分析法的分类

2.1放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA) 放射免疫分析法是最早建立的一种免疫分析法,是放射性同位素测定法与免疫反应基本原理相结合的一种同位素分析技术。该法具有 灵敏度高、特异性强、标记物容易制备以及放射性强度容易检测等优点,特别适合复杂样品中微量或痕量物质的分析,在体内药物分析中占有独特的地位。

2.2酶免疫分析法(enzymeimmunoassay,EIA) 1966年Avrameas和Uriel首先将酶偶联于抗原和抗体,1974年Syvaco首先报道了均相酶测免疫分析(enzymemonitoredimmtlnoas2 say,EMIT),开创了酶免疫分析的临床应用。酶免疫分析的基本原理是在抗体或抗原分子上连接酶分子,进行免疫反应,免疫复合物上的酶将特定的底物转化为特定的颜色,用分光光度计测定,由颜色的深浅确定待测物的量,其催化底物可与核素一样起到信息放大作用,具有很高的灵敏度,检测下限可达到ng甚至pg水平,有效期大大超过了125I标记物,而且能减少放射性废物。

2.3化学发光免疫分析(chemiluminescentenzymeimmunoas2say,CLEIA) 化学发光免疫分析包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子,利用发光信号测量仪器光量子产率。免疫反应系统是将标记物质直接标记在抗原或抗体上,

经过特异性反应后,形成抗原一抗体复合物。然后采用相应标记物的检测方法进行检测。

2.4荧光免疫分析(fluorescenceimmunoassay,FIA) 荧光免疫分析是以荧光物质作为标记物与待测药物结合,所形成的荧光标记药物能与抗体发生免疫反应,引起荧光强度发生变化的一种分析方法。

3免疫化学法的应用

在体内药物分析中，免疫法的应用主要集中在以下几方面：（1）在实验药物动力学和临床药物学呃呃中测定生物利用度和药物代谢动力学参数等生物药剂学中的重要数据，以便了解药物在体内的吸收、分解、代谢和排泄情况。(2)在药物的临床检测中，对治疗指数小，超过安全剂量易发生严重不良反应或最佳治疗浓度和毒性反应浓度有交叉的药物血液浓度进行监测。（3）在药物生产中从发酵液或细胞培养液中快速测定有效组分的含量，以实现对生产过程的在线监测。（4）对药品中是否存在特定的微量有害杂质进行评价。