牛O-P液采样方法和注意事项
梁 勇，潘 杰
【期刊名称】畜牧兽医科技信息 【年(卷),期】2018(000)006 【总页数】1
牛O-P液是牛食道-咽部分泌物的缩写，主要作为口蹄疫等病原学检测样品，从而评估免疫抗体水平，了解病原分布状况及疫情风险。掌握正确的牛O-P液采样方法对保证样品的真实性起着关键性作用。
1 材料
1.1 工 具 金属探杯、灭菌广口瓶、采样箱、记号笔、标签、封口膜、一次性手套、口罩、防护服、水鞋、防护镜、牵引绳、保定架、鼻钳。 1.2 试剂
1.2.1 10.1mol/L PBS液
氯化钠80g，氯化钾2g，磷酸氢二钠30g，磷酸二氢钾2g，蒸馏水1000mL，0.04mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液（0.1mol/L PBS液400mL,蒸馏水600mL）。 1.2.2 0.5%水解乳蛋白/Earle液
氯化钠6.8g，氯化钾0.4g，氯化钙0.2g，硫酸镁0.2g，磷酸二氢钠0.14g，葡萄糖1g，10%酚红2g，水解乳蛋白5g，加双蒸馏水1000mL。按配方称取各成分并逐个溶解，最后加双蒸馏水1000mL，过滤除菌，或69kpa高压蒸汽灭菌15min，室温或4℃保存。
2 方法
2.1 样品采集 采样探杯在使用前经0.2%柠檬酸或2%氢氧化钠浸泡5min，再
用自来水冲洗。采样时动物站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10～15cm处，轻轻来回移动2～3次，然后将探杯拉出。
2.2 样品保存 将探杯采集到的8～10mL O-P液倒入25mL以上的灭菌玻璃容器中,容器中应事先加有8～10mL细胞培养液（0.5%水解乳蛋白-Earle液）或磷酸盐缓冲液（0.04mol/L、pH7.4），加盖密封后充分摇匀，贴上防水标签，并做好标识，尽快放入装有冰块的冷藏箱内，然后转往-30℃冰箱冻存待检。
3 注意事项
3.1 动物的保定 尽量选择牵有鼻绳的牛，配备保定架，将牛赶入保定架前后栅栏关上后，牵拉牛头成45°仰角，将鼻绳在保定架转角位置绕3～4圈，期间不断测试是否容易松脱
，使牛头完全固定好。对没有鼻绳的牛，需要借助鼻钳尽量向前向上牵引，牛肩胛骨位置套上保定装置防止牛动作太大，期间需要注意牛角对采样人员的伤害。
3.2 样品洁净度 被检动物在采样前禁食（可饮水）12h，以免反刍胃内容物严重污染O-P液。如采集的O-P液被反刍胃内容物严重污染，要用生理盐水或自来水冲洗口腔后重新采样。
3.3 探杯的使用 一头动物使用一个探杯，所使用的探杯与铁丝焊好，采样前检查是否出现松脱等情况，防止探杯因动物反抗过大被滞留在体内。
3.4 人员的防护 按顺序穿戴防护用品，依次为口罩、防护镜、第一层手套、防护服、口罩、第二层手套并套在防护服袖口外面。卸载顺序则为外手套、防护镜、防护服、水鞋、口罩、内层手套，并将使用过的防护用品分开装载，一般为可反复使用的水鞋待消毒后循环使用，其他一次性防护用品另外包装集中销
毁。在采样过程中，要首先保证动物保定好，尤其是角、蹄等具伤害性部位处于安全防护范围，保定栏结实防止动物冲撞。
牛O-P液采样方法和注意事项
