第一节临床标本的处理
一.临床标本处理的一般原则
(一)标本采集的时间和注意事项 (二)标本的类型和数量 (三)标本采集部位的准备 (四)标本的运送 (五)标本的保存
(六)标本处理中的生物安全问题
二、常见临床标本的处理方法
(一)血液标本
1.全血标本 2.血清(浆)标本
3.外周血单个核细胞 (二)棉拭子 (三)体液标本 (四)痰液标本 (五)组织标本 (六)细胞标本
第二节生物样本分离纯化与质量鉴定 一、生物样本分离纯化策略
二、DNA的分离纯化
(一)基因组DNA的纯化 (二)吸附柱法提取DNA (三)质粒DNA的分离纯化 (四)线粒体DNA的分离纯化 (五)血浆中游离DNA的分离纯化
三. RNA的分离纯化
(一)总RNA的制备 (二) mRNA的制备
(三)循环miRNA的制备 (四)长链非编码RNA的制备
四、自动化核酸提取系统 五、蛋白质的分离纯化
(一)蛋白质的性质与纯化原则
(二)从细胞或组织中提取蛋白的常用方法
1.根据蛋白分子大小不同分离纯化 2.根据蛋白分子溶解度不同分离纯化 3.根据蛋白表面电荷不同分离纯化 4.采用配体的特异性亲和力分离纯化
(三)膜蛋白的分离与纯化 六、核酸和蛋白的鉴定
(一)核酸的鉴定
1.核酸含量测定 2.核酸的纯度鉴定 3.核酸的完整性检测
(二)蛋白质的鉴定
第一节临床分子生物学检验技 术的发展 一.从分子生物学到临床分子生物学检验 二.临床分子生物学检验技术的发展 第二节临床分子生物学检验技术应 用 一.病原生物基因组 1.菌种鉴定
2.确定病毒感染和病毒载量 3.病毒分析
4.细菌耐药监测和分子流行病学调查 二、基因变异
1.致病基因的分子缺陷 2.线粒体基因突变 3.肿瘤相关基因
4. DNA重排形成融合基因 三、基因多态性
1.基因定位和遗传病相关性分析 2.药物代谢酶与血药浓度 3.疾病诊断和遗传咨询 4.多基因病的研究
5.器官移植配型和个体识别 四、循环游离核酸 1.循环游离核酸与肿瘤 2.游离核酸与产前诊断
3.循环microRNA与肿瘤诊断
第三节临床分子生物学检验发展与 应用 一.临床分子生物学检验与感染性疾病诊 断与治疗
二、遗传性疾病的临床分子生物学检验 三、肿瘤的临床分子生物学检验
四、临床分子生物学检验与个体化医学
第一节分子生物标志物的概念 与分类 一、生物标志物的概念与分类
二.分子生物标志物的概念与分类
(一) DNA生物标志物 (二) RNA生物标志物 (三)蛋白质生物标志物
第二节核酸分子生 物标志物 一、基因组和基因组特征
(一)原核生物基因组
1.原核生物基因组特征 2.质粒
(二)病毒基因组
1.基因组的碱基组成 2.基因组的核酸类型
3.基因组中有基因重叠现象 4.基因组中具有操纵子结构 5.病毒基因可连续也可间断
6.基因组中重复序列少 7.基因组中非编码区少 8.基因组是单倍体 9.相关基因丛集
10. 病毒基因组含有不规则结构基因
(三)人类基因组
1.单一序列 2.重复序列
3.多基因家族和假基因
二、基于基因突变的分子生物标志物
(一)点突变
1.错义突变 2.无义突变
3. RNA加工突变
(二)插入/缺失突变 (三)动态突变
三、基于基因多态性的分子生物标志物
(一)限制性片段长度多态性 (二)小卫星和微卫星多态性 (三)单核苷酸多态性 (四)拷贝数多态性
四、基于DNA甲基化修饰的分子生物标志物 五.基于转录产物的分子生物标志物
(一) mRNA标志物 (二) miRNA标志物
(三)长链非编码RNA标志物
六、基于线粒体DNA的分子生物标志物 七、基于循环核酸的分子生物标志物
(一)循环肿瘤细胞DNA (二)母体血清中的胎儿DNA (三)循环DNA的其他应用 (四)血浆RNA
第三节分子生物标志物的发 现与评价 一.高通量技术与分子生物标志物的发现
(一)基因组学 (二)转录组学 (三)蛋白质组学 (四)代谢组学
二、分子生物标志物的特征和评估
(一)分子生物标志物的特征
(二)分子生物标志物评估的基本统计学方法 (三)生物标志物的评价阶段
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