小鼠肝癌原位移植模型的建立及其意义的研究①
项亮亮，侯 杰，王 婕，焦成斌
【摘 要】摘要：目的：探讨用肝癌H22细胞建立小鼠肝癌原位移植模型。方法：将肝癌H22细胞注入小鼠腹腔内，建立异位移植模型；抽取腹水中癌细胞接种于小鼠肝实质内，建立原位移植模型。结果：移植后10d可扪及肿瘤生长，模型成功率94.4%；晚期自发转移率79.4%，腹水产生率35.3%，无自发消退；移植瘤保持甲胎蛋白(AFP)、异常凝血酶原(DCP)高分泌及γ-氨基酰转氨酶(γ-GT)同工酶阳性的特点；模型平均自然生存期28d。结论：小鼠肝癌原位模型成功率高，易于制作，生物学特征符合模拟人类肝癌在体内发生发展的全过程，可成为今后人类研究肝癌的重要动物模型。 【期刊名称】黑龙江医药科学 【年(卷),期】2015(038)006 【总页数】2
【关键词】肝癌；H22细胞；原位移植模型；小鼠
肝癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一，因其发病率高、恶性程度高、死亡率高，素有“癌中之王”的称号[1]。目前已有大量研究为肝癌临床的治疗提供基础依据，而肝癌动物模型一直是肝癌临床与基础研究工作的重要工具。目前有关人肿瘤转移模型大多是用裸大鼠、裸小鼠,动物肿瘤则多数是用Wistar或SD大鼠建立的,而用小鼠建立原位肿瘤移植模型国内外报道较少。小鼠作为一种更经济，易饲养，易获得的实验研究载体，在发挥其普遍应用性方面有着重大的作用。小鼠肝癌原位移植模型作为一种新型的动物模型是否能更好地模拟人肝癌在体内发生、发展、侵袭及转移的过程，本实验将研究报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物及瘤株
SPF级昆明小鼠40只，雄性，鼠龄5周龄，体重约18~22g；腹水型肝癌H22细胞株，由佳木斯大学中心实验室代为冻存。 1.2 实验仪器及材料
台式低温高速离心机、切片机、光学显微镜、游标卡尺、电子精密天平、无菌操作台、10%福尔马林固定液、水合氯醛、伊红、苏木素、琼脂糖等。 1.3 模型制作
1.3.1 异位模型制作：将冻存的肝癌H22细胞株复苏，体外培养至对数期后，以生理盐水调整细胞浓度至1×107个/mL,每只小鼠腹腔内注射0.5mL，共4只。注射7d后在无菌条件下抽出腹水，离心,去除杂质细胞，调整癌细胞浓度至1×107个/mL备用，进行原位移植[2]。
1.3.2 原位模型制作：采取开腹手术直接注入肝脏法。昆明小鼠共36只。(1)取5周龄小鼠，抓取固定，腹部剃毛，75%医用酒精消毒，按小鼠体重的0.3%比例行水合氯醛腹腔注射麻醉，麻醉起效后，将小鼠四肢固定小手术台上，腹部再次消毒，取剑突下上腹部正中切口，长约1.2cm，剪开皮肤、腹白线及腹膜，压迫止血，轻轻挤压小鼠双侧腹壁，将小鼠肝左叶挤压出腹腔。(2)取无菌注射器将0.1mLH22肿瘤细胞注入左肝实质内，退出针头，轻压针眼，取烧红的铁丝轻灼针眼，防止肿瘤细胞逃逸，发生腹腔种植，将肝左叶轻轻送回腹腔。(3)查无活动性出血，取1号丝线缝合腹壁各层，消毒，小创口贴切口黏贴，结束造模。
1.4 观察指标及方法
1.4.1 模型观察：定期观察荷瘤小鼠生存、活动状况及腹部体征。扪查腹部了解移植瘤形成时间、质地及大小，以小鼠腹部可触及实体性包块为成瘤标志。留取10只荷瘤小鼠观察其带瘤的自然生存期。
1.4.2 解剖学及病理学观察：当小鼠出现消瘦、精神萎靡等体征时处死小鼠。开腹肉眼观察肿瘤生长部位、质地、活动度、浸润、腹水及腹腔转移情况。游标卡尺测量瘤体的长(l)、宽(w)、高(h)，体积(v)= π(l×w×h)/6计算[3，4]。10%福尔马林液固定瘤体，石蜡包埋，切片，经HE染色作常规病理检查。 1.4.3 血清学检测：小鼠处死前，采用眼球摘除法取血，及时分离血清。ELISA法检测AFP[5]、DCP[6]，γ-GTⅡ检测用聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳法分离，凡出现Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ带任一条即可判定结果阳性[7]。 1.5 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件包，计量资料采用均数加减标准差表示。
2 结果
2.1 造模情况
模型成功率达94.4%(34/36)。移植5d左右小鼠皮肤伤口愈合。10d左右中上腹可扪及直径约0.4～0.6cm，位置固定、质地稍软的实体肿块。14d可扪及较明显的肿块，随后肿瘤生长速度增快，肿瘤大小略有差异。21d瘤径达2.0cm左右，可见腹部膨隆，部分小鼠出现消瘦、精神萎靡、行动迟缓等现象。模型平均自然生存期28d。 2.2 大体解剖观察
移植瘤形态相对规则，成圆形或椭圆形，大部分暗红色，局部为白色，实质性，质较硬，与周围肝组织间完全或部分包膜包绕，表面有大小不等的结节，以浸
小鼠肝癌原位移植模型的建立及其意义的研究
