人脂肪干细胞的分离培养与生物学特性

人脂肪干细胞的分离培养与生物学特性

作者：田霖;孙筱放;刘海波;骆玉梅;陈欣洁;黄东健

作者机构：广州医学院第三附属医院,广东省广州市510150 来源：中国组织工程研究 年：2012 卷：016 期：032

页码：P.5946-5952 页数：7

中图分类：R394.2 正文语种：CHI

关键词：人脂肪干细胞;分离;体外扩增培养;鉴定;染色体核型;生物学特性 摘要：背景：高效、稳定地获得大量较高纯度的人脂肪干细胞,是其在组织工程学及再生医学中广泛应用的基础和前提。目的：探索体外培养脂肪干细胞的适宜条件,从而提高其增殖能力。方法：采用胶原酶消化的方法,从人腹部皮下块状脂肪中分离出脂肪干细胞,经贴壁筛选法纯化细胞、低糖培养基体外培养扩增。Giesam染色后观察细胞形态;绘制细胞生长曲线并进行细胞周期分析,观察分析传代后染色体核型改变;选取第3代脂肪干细胞做流式细胞鉴定、EdU细胞增殖能力检测以及克隆形成实验。结果与结论：分离培养的原代脂肪干细胞形态不一,经传代后的细胞形态趋于长梭形,排列紧密呈漩涡状生长。细胞生长曲线呈S形,细胞周期分析及EdU掺入法结果显示体外培养的脂肪干细胞具有较强的增殖能力。经染色体核型分析结果提示,体外培养不会引起脂肪干细胞的核型改变。第3代脂肪干细胞经流式细胞仪检测CD29,CD44,CD90,CD105均呈阳性表达,而CD34和CD45呈阴性;克隆形成率为8.8%;在一定的诱导条件下,脂肪干细胞能够向脂肪细胞及成骨细胞分化。结果说明采用胶原酶消化法可成功分离培养人脂肪干细胞,且具有较强的增殖能力。